流式细胞术系列之-白血病免疫分型.pptVIP

流式细胞术在白血病免疫分型中的应用 标本来源 （1）外周血 （2）骨髓穿刺液， （3）骨髓活检标本 （4）淋巴组织穿刺 样本保存 要 求： 室温条件(16℃ -28℃ )存放； 如非液态标本，则要在标本中加入足量的等渗液体（如 生理盐水或组织培养液）。 保存时间 肝素抗凝的外周血和骨髓标本，存放时限为48～72小时； EDTA抗凝标本，存放时限只有12 ～ 24小时，因为髓细胞在此条件下会裂解； 柠檬酸（ACD）抗凝的外周血标本可存放72小时以上。但此方法不推荐用于骨髓穿刺标本，因为高浓度的ACD会引起pH值变化而导致骨髓细胞死亡 正常骨髓流式分析图 CD45/SSC 图中可见： CD45 强阳性SSC 低信号的细胞群为淋巴细胞(褐色细胞群体) 中等强度的CD45 表达SSC 信号最强的细胞群体为粒细胞(蓝色及红色细胞群体) CD45 表达与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体(绿色细胞群体) CD45 阴性SSC 信号最低的有核红细胞和细胞碎片 根据骨髓细胞CD45/SSC 图中分布情况设门圈定各类细胞 R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞通常会在R4 R6 两门位置处出现 T-ALL B-ALL AML-M0 幼稚细胞群体的FSC和SSC信号低，在CD45/SSC点图中特征性地与幼稚淋巴细胞区域相连，Blasts 90%。 AML-M1 幼稚细胞群体的FSC和SSC信号与M0相似，Blasts 90%。 此类型白血病细胞除了占优势的幼稚细胞外还存在已明显分化的细胞群体，至少已分化至早幼粒细胞或粒细胞水平。 其典型的形态学特征表现在SSC vs CD45图中可观察到一群比较分散的细胞群，此群细胞与成熟粒细胞相互交叉。 CD45/SSC图中细胞分布广泛与M1不同，这是因为M2细胞已进一步分化幼稚细胞减少，粒细胞增多并与BLAST WINDOWS区域内细胞相连。 AML-M3 （急性早幼粒细胞白血病） 左图为M3V，少颗粒（细颗粒）型早幼粒白血病细胞，细胞中颗粒少SSC信号低而集中。 通过CD45/SSC双参图可辨别出M3与M3V。右为经典M3多颗粒细胞的CD45/SSC图。 AML-M4 （急性粒单细胞白血病） 典型M4CD45/SSC图中会出现一群异常的单核细胞和一群骨髓幼稚细胞。 有时这两群细胞会相互叠加占据BLAST WINDOWS和成熟单核细胞位置，故难圈出独立成群的肿瘤细胞。 对于M4病例一般都设多个门对异常细胞进行分析，且每个异常细胞群根据其成熟度的不同，表型也可能互不相同。 本例为M4EO，增多的嗜酸细胞SSC信号与早幼粒相似;CD45信号与单核细胞相似。 在M5病例中除部分白血病细胞向单核细胞分化外，剩余的白血病细胞都是幼稚细胞，且这些幼稚细胞在CD45 vs RALS 图中占据blast windows，CD34阳性但单核细胞系相关抗原为阴性。 表型与M4相似，CD13和/或CD33阳性，CD33CD13，HLA-DR、CD14（+/-）、CD15与CD11B阳性。CD34阳性/阴性，MPO阳性。 M5肿瘤细胞从细胞大小、颗粒度和CD45表达都向成熟单核细胞过渡，形成一大细胞群体。 髓细胞白血病红细胞分化型对应于FAB的M6，在形态学上幼稚红细胞计数大于髓系细胞的50%且髓系幼稚细胞占非红细胞的30%以上。然而因为幼红会因标本处理中溶血步骤而被破坏，当流式细胞仪分析时有核红细胞占总细胞数的50%以下时，红细胞白血病很难与MDS（骨髓增生异常综合症）和早期白血病区分开来。 本例中可见两群幼稚细胞，M6的定义是红系祖细胞占骨髓幼稚细胞群体的50%强，而其他系别的幼稚细胞可占30%以上。 固诊断M6时要依据形态学红系细胞的数量来确定，如仅根据免疫分型很难得出正确诊断，必须结合形态计数幼稚细胞数量来确定。以上是典型的M6免疫分型图，出现两群幼稚细胞。 诊断巨核细胞白血病通常依靠免疫分型，因为形态学和遗传学都不能对此做出明确诊断且从超微结构上判别血小板过氧化物酶存在技术上的难点。 巨核细胞白血病细胞高表达CD61和CD41。 M7 总结 目前急性白血病的分类仍较复杂，流式细胞术免疫分型能提高分型的准确性，但不是疾病的诊断。 理想分类法应该以形态学为基础，结合免疫学和细胞遗传学、分子生物学提供信息。 国际血液学家及血液病理学家2001年3月里昂会议上的造血和淋巴组织肿瘤的WHO分类法，应用MICM分类技术力求反映疾病本质，成为国际上一种新的分类标准。 AML-M7 （急性巨核细胞白血病） CD13、CD33、 CD34、H