HPLC法测定不同制法的四逆汤中3种苯甲酰类乌头碱及6-姜酚含量.pdfVIP

2013年’哼19謦 第5期 、^n^nI、，。moderninstrs．org．crl 叫逆汤 白 《伤寒论》，由附子 、干姜 、炙甘草组成， 加 75％甲醇制成0．7mgm·L 的对照品储备液。精密吸取 用于阳虚欲脱，冷汗 白}n，四肢厥逆，下利清谷，脉微欲 上述储备液适量于容量瓶中，加 75％甲醇制成浓度为 70 绝等证。近年来研究发现四逆汤具有很好的抗心肌缺血、 g·mL。的6一姜酚对照品溶液。 再灌注损伤及保护心叽的作用 ]。炮制后的附子中单酯 2．1．2 3种不同制法四逆汤供试液的制备 传统汤剂 ：黑 型生物碱是四逆汤抗心肌缺血的关键有效成分 l，主要包 附子 50g，炙甘草50g，干姜 33g(均过20目筛)，加入 括苯甲酰新乌头碱 、苯甲酰乌头原碱 、苯甲酰次乌头原碱 8倍量水浸泡 1h后 ，煎煮30rain，过滤，残渣加6倍量 等，十姜r{1的6一姜酚也是四逆汤重要有效成分之一，具 水煎煮20rain，过滤，滤液合并，浓缩至250mL，冷藏备用。 有改善心肌舒缩性能，缓解心衰症状作用 】。本实验采用 药典复方提取液 ：黑附子50g，炙甘草50g(均过20 HPLC法测定苯甲酰新乌头原碱 、苯 甲酰乌头原碱 、苯 甲 目筛)，加入 8倍量水加热回流提取2h，过滤，残渣加 6 酰次乌头原碱、6一姜酚的含量，比较传统水提法、药典 倍量水再加热回流提取 1h，过滤，滤液合并。取干姜粉 收录的水提醇沉法及有效部位组合法制备的四逆汤中以上 末33g(过 20目筛 )，加 12倍量水，水蒸气蒸馏提取 5 4种有效成分的含量差异，对四逆汤提取工艺的改进提供 h，蒸馏后水溶液备用，残渣加6倍量水煎煮 1h，过滤， 参考依据。 煎液合并再与附子 、炙甘草提取液合并 ，浓缩至 100mL， 加无水乙醇300mL，静置 10h后离心 ，取上清液，旋蒸 l 仪器与试药 浓缩至250mL，冷藏备用。 Agilent1200高效液相色谱仪 (美国Agilent公司，四 有效部位组合液 ：黑附子粗粉50g(过20目筛 )，24 元泵、自动进样器、恒温箱 、DAD检测器，Chem Station 倍量pH=1．0盐酸溶液振荡提取 2次，每次 1．5h，过滤， 色谱T作站)；MettlerAE240电子天平(瑞士梅特勒公司)； 合并滤液 [6】。炙甘草粗粉 50g(过20目筛)，20倍量0．3％ KQ一250E型医用超声波清洗器 (群山市超声仪器有限公 氨水 ．60％乙醇加热回流提取4次，每次2h，过滤，合 司)；恒温振荡器 (圉华仪器有限公司)；RE．52C旋转蒸 并滤液 。干姜粗粉 33g(过20目筛)，14倍量水浸泡3 发器 (上海亚荣生化仪器厂 )。 h后水蒸气蒸馏提取 5h，蒸馏后水溶液备用，残渣加6 药材黑附子 、甘草、干姜均购于山东济南建联中药店 ， 倍量水煎煮 1h，煎液与上次蒸馏后水溶液合并 ]。将各 经山东中医药大学生药系李峰教授鉴定为黑附子 (毛茛 单味药提取液转移合并浓缩为250mL，冷藏备用。 科植物乌头Aconitum carmichaeliiDebx．)的子根炮制加 2．1．3 HPLC供试液的制备 苯 甲酰类乌头碱供试液的 一 品、千姜 (姜科植物姜ZingiberofficinaleRose．)的干 制备 ：分别取传统提取液、药典法提取液、有效部位组合 燥根茎 、什草 (豆科植物什草 GlycyrrhizauralensisFisch．) 液各 10mL于90℃水浴蒸干 (折合溶液中所含黑附子量 的炮制加丁品 ；苯甲酰新乌头原碱 、苯甲酰乌头原碱 、苯 为2g)，精密加入异丙醇一二氯甲烷 (1：1)混