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结核分枝杆菌检测及相关内容
控制结核 人人有责 3月24日是第13个“世界防治结核病日”,今年卫生部的宣传主题是“控制结核、人人有责”。疾病预防控制中心提出,目前结核病仍然是严重危害人类健康的主要传染病之一,75%的病人为中青年,每年死亡13万人。 结核分枝杆菌检测及相关内容 张东华 一、结核名称的由来 结核病是一种古老的疾病,也许有了人类不久就已有了它的存在。1973年,湖南长沙马王堆汉墓出土的2100年前的女尸身上发现左上肺门均有结核病灶。1965年,法国学者Sylvius根据解剖了死于所谓“消耗病”或“痨病”人的尸体,发现肺脏及其它器官有颗粒状的病变,根据其形态特征称之为“结核”。因而,结核的名称就此而被应用至今。 二、结核病 结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,可以侵及很多脏器,以肺部受累形成肺结核〔pulmonary tuberculosis〕最为常见;其次有肠结核、淋巴结结核、泌尿系结核、骨结核、结核性脑膜炎、全身粟粒性结核、结核性腹膜炎等。 三、我国结核病疫情现状 据2000年全国结核病流行病学抽样调查结果显示,我国结核病疫情现状为:(1)结核病感染率高:目前全年龄组结核菌感染率为44.5%,全国约5.5亿人受到了结核菌感染,结核菌感染率高于全球人口感染率为1/3的水平。(2)结核病患病率高:全国活动性肺结核患病率为367/10万,涂阳肺结核患病率为122/10万,菌阳肺结核患病率为160/10万;估算全国现有活动性肺结核病人数450万,其中涂阳肺结核病人150万,菌阳肺结核病人200万。(3)结核病耐药率高:肺结核病人结核菌初始耐药率为18.6/10万, 继发耐药率为46.5/10万。按照全国菌阳肺结核病人200万计算,全国有耐药病人55.5万。(4)结核病死亡率高:全国结核病死亡专率为9.8/10万,每年因结核病死亡13万人,为各种其他传染病和寄生虫病死亡总和的2倍。 四、肺结核的主要症状 肺结核是由结核杆菌引起的一种慢性肺部感染性疾病。病初有轻微咳嗽或咯痰,或有四肢结节性红斑。部分病人表现为胸痛、咯血。常见的全身症状有周身不适,精神萎靡,易倦乏力,性情烦躁,心悸,食欲减退,体重减轻,盗汗,不规则低热,两颧潮红,妇女月经不调。也有无明显症状,仅在胸部X线健康检查时才被发现。在慢性病程中,病情恶化,可有高热畏寒,紫绀气促,肺萎缩,肺气肿,渗出性胸膜炎,胸膜增厚等。本病的病因与结核杆菌感染因素有关 。本病主要诊断依据结合局部和全身症状。痰液检查找到结核杆菌可确诊 。 五、结核分枝杆菌检测方法 (一)涂片检查 (二)分离培养 (三)动物试验 (四)基因诊断 (一)标本的收集及直接涂片法 1.痰标本 最好为清晨第一口痰,洁净水或冷开水漱口后,用力咳嗽以获得2-3ml痰液置于标本盒内,直接涂2.0cm×2.5cm的卵圆形痰膜,自然干燥后抗酸染色镜检即可。涂片应使用干净无划痕的新玻片。痰标本不能使用蜡盒,因为其可导致涂片结果假阳性。 (二)集菌涂片法 取深咳痰10ml于消毒处理过的广口瓶中,加5倍量的无菌蒸馏水,经121℃高压蒸汽灭菌20min,待用。 离心集菌法:取上述痰液10ml放入50ml离心管内加蒸馏水至50ml, 3000r/min离心30min,取沉淀物涂片。 漂浮集菌法:取上述痰液10ml放入100ml细口玻璃容器内,加蒸馏水30ml,加入二甲苯0.3ml,振荡10min,加蒸馏水至满,静置15min,取载玻片盖于瓶口,静置15min,取下玻片,干后染色。 目前我们实验室采用BaSO溶痰剂与痰检体2:1或3:1混合均匀,静置10~20min,待其完全溶化,离心取沉淀涂片染色。简化了操作过程。 (三)染色方法 1.抗酸染色 第一液:碱性复红乙醇溶液 10ml 5%石炭酸溶液 90ml 第二液:浓盐酸 3ml 95 %乙醇 97ml 第三液:美蓝乙醇饱和溶液 100 ml 10 %KOH 0.1ml 蒸馏水 100ml 染色步骤:⑴涂片经火焰固定后加第一液约5min,水洗。⑵第二液脱色,至涂片无红色脱出为止,水洗。⑶第三液复染约30s,水洗,自然干燥后镜检。 结果:抗酸杆菌呈红色,背景为蓝色。 报告方式;﹙?﹚未发现抗酸菌/300个油镜视野 (±)1~ 2个抗酸菌/300个油镜视野 (1+) 3~9个抗酸
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