自制麻痹性贝毒GTX2,3单克隆抗体在直接竞争酶免疫学检测方法中的初步应用.pdfVIP

AND INSPECTION V01．18No．4 QUARANTINESCIENCE检验检疫科学 2008年第4期 自制麻痹性贝毒GTX2，3单克隆抗体在直接竞争酶免疫学 检测方法中的初步应用 罗辉武1向军俭2 (1．惠州学院，广东惠州，516007，2．暨南大学，广东广州，510632) 反应。[Jt论】初步建立的dc—ELISA适用于麻痹性贝类毒索的快速检测，为其酶免疫学快速检测试剂金的研制奠定了 基础。 关键词：麻痹性贝类毒素。单克隆抗体。直接竞争。ELISA 中图分类号：17,996．1。Q503 1前言 2．2实验方法 shellfish 2．2．1GTX2，3与HRP偶联物的制备 麻痹性贝类毒素(paralyticpoisoning，IX3P) 主要由海洋赤潮藻中的亚力山大藻等产生，是最常见 的赤潮毒素之一。PSP毒素具有极强的神经毒性，当 法进行，反应完成后于PBS溶液中透析除去游离的 人类食入含有该类毒素的食物时就会造成神经麻痹、 毒素。 呼吸困难甚至死亡。我国是一个赤潮灾害多发的国 2．2．2直接ELlSA鉴定G儇2，3一m蹬偶联物 家，南北海区均存在可产生麻痹性贝类毒素的赤潮藻， 且在多个采样点发现多种贝类含有麻痹性贝类毒素【”。 缓冲液稀释后包被酶标板，每孔1001zL，4℃包被过 我国南方沿海染毒贝类和有毒赤潮藻中常见的PSP毒 h， 素是膝沟藻毒素(GTX2，3)回。对于PSP毒素的免疫学 快速检测，国外已有报道阁，也有相关的商品化免疫 酶标板3次，然后加入适当稀释度的(；TX2，3腹水型 学快速检测试剂盒上市。国外研制的试剂盒价格昂 贵，由于毒素种类的差异也不适合在我国大规模推 联物，同时设HRP对照，洗板3次，OPD显色，测 广。由于PSP毒素种类较多、提取困难，本研究通过 0D492值。 自制GTX2，3单克隆抗体并初步研究了该单克隆抗体2．2．3直接竞争ELISA 在直接竞争酶免疫学快速检测中的应用，为最终建立 分别取50止适当稀释的GTX2，3腹水型单克隆 GTX2，3的酶免疫学快速检测方法奠定了基础。 抗体、不同浓度的GTX2，3的标准毒素，适当稀释的 2材料与方法 2．1仪器和试剂 合液加入到用适当稀释的兔抗小鼠IgG多抗包被的酶 膝沟藻毒素GTX2，3由香港科技大学Hsieh教授’ 惠赠，酶标板购自深圳金灿华公司t辣根过氧化物酶 以抑制率为20％时的标准毒素的浓度作为该检测方法 Thermo HRP为AlRresco公司产品lLabsystems公司酶的灵敏度，当抑制率为20％-80％时这一范围的毒素 标仪，腹水型GTX2，3单克隆抗体为本实验室自制。浓度作为该检测方法的工作范围。 基金嘎目：国家自然科学基金项目和广州市科技局项目(200J-004．01)。 ·6· 万方数据 No．4 AND 2008年第4期V01．18 检验检疫科学INSPECTIONQUARANTINE SCIE—NCE 22A直接竞争EUSA测定该方法与C2毒素的交叉反应 用(图3)。由此可知，用该方法检测GTX2，3时，与 分别