米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达的影响-中国医药生物技术.pdfVIP

中国医药生物技术 2009 年 12 月第4 卷第 6 期 Chin Med Biotechnol, December 2009, Vol. 4, No. 6 411 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2009.06.003 ·论著· 米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白 8 表达的影响 李燕，段赵宁，漆洪波 【摘要】 进细胞膜水通透性增加[1]，其中 AQP8 可在人胎盘 目的 观察米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白 8 和胎膜表达，提示 AQP8 对于维持羊水量稳态平 （AQP8 ）表达的影响，探讨药物调控羊膜上皮细胞 AQP8 衡具有重要作用[2] 。米非司酮是一种临床应用广 表达的可行性。 泛的终止妊娠药物，可取代体内孕酮与孕酮受体 方法 将体外培养的人羊膜上皮 WISH 细胞分为不同浓度 PR ）相结合，进而抑制孕酮活性，其主要代谢产 米非司酮作用 48 h 组和单一浓度米非司酮作用不同时间 物对人孕酮受体和糖皮质激素受体（glucocorticoid 组，前者培养基中分别加入终浓度为 0.1 、1、5、10、15 µmol/L receptor ，GR ）均有较强的亲和力[3] ；同时还有研 的米非司酮，培养 48 h ；后者培养基中加入终浓度为 究发现羊膜和绒毛膜细胞均为米非司酮作用的靶 10 μmol/L 的米非司酮，分别培养 6 、12、24 、36、48 h ， 细胞[4-6] 。鉴于此，本研究观察了米非司酮对人羊膜 同时 2 组均设加入含 0.01% 二甲基亚砜（DMSO ）完全培 上皮 WISH 细胞 AQP8 mRNA 及其蛋白表达的 养液的对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测 10 μmol/L 影响，以进一步探讨米非司酮调控羊水量的可能性 米非司酮作用 48 h 后细胞 AQP8 蛋白的分布；RT-PCR 及其终止妊娠的药理机制。 和蛋白质印迹技术分别检测不同浓度米非司酮作用组和米 非司酮作用不同时间组各组细胞 AQP8 mRNA 和蛋白的表 1 材料与方法 达水平。 1.1 材料 结果 免疫荧光细胞化学检测显示，米非司酮作用后 WISH 1.1.1 细胞株 人羊膜上皮 WISH 细胞购自中 国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生 细胞细胞质内及细胞膜上 AQP8 蛋白黄绿色荧光信号较 对照组均明显减弱。在不同浓度米非司酮作用组中，除 物学研究所，在含 10% 小牛血清的 RPMI 1640 培 0.1 µmol/L 组外，其余各组细胞的 AQP8 mRNA 和蛋白表 养基内于 37 ℃、5% CO2 孵箱中常规培养。 达水平分别与对照组相比均明显减弱（均 P 0.01 ），而 1.1.2 试剂与仪器 二甲基亚砜（DMSO ）购自美 0.1、1、5、10 µmol/L 组细胞的 AQP8 mRNA 表达水平和 国 Sigma 公司，兔抗人 AQP8 多克隆抗体、山羊 1、5 、10 µmol/L 组细胞的 AQP8 蛋白表达水平分别与 抗人亲和纯化的 AQP8 抗体购自美国 Santa Cruz 15 µmol/L 组比较，差异均有统计学意义（均 P 0.05 ）。 公司，FITC 标记的羊抗兔 IgG 抗体、HRP 标记 在米非司酮作用不同时间组中，除 6 h 组外，其余各组细 的兔抗山羊 IgG 抗体和兔抗鼠 IgG 抗体购自武 胞的 AQP8 mRNA 和蛋白表达水平分别与对照组相比均明 汉博士德生物工程有限公司，小鼠抗 β-肌动蛋白 显减弱（均 P 0.01 ），而 6 、12、24 、36 h 组细胞的 AQP8 （β-actin ）单克隆抗体购自北京三杉公司，Trizol 试 mRNA