类志贺邻单胞菌噬菌体фp7裂解酶gp2的表达-天津科技大学学报.pdfVIP

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2017-11-11 发布于天津
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类志贺邻单胞菌噬菌体фp7裂解酶gp2的表达-天津科技大学学报.pdf

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第 32 卷第 3 期天津科技大学学报 Vol. 32 No. 3 2017 年 6 月 Journal of Tianjin University of Science Technology Jun. 2017 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510 类志贺邻单胞菌噬菌体 ФP4-7 裂解酶 Gp2 的表达及活性测定何洋，荆兆元，杨洪江 (工业发酵微生物教育部重点实验室，天津市工业微生物重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457) 摘要：多重耐药菌株的出现给临床治疗带来了困难，噬菌体编码的裂解酶能够杀死病原菌，是潜在的重要杀菌因子．本实验采用 PCR 技术，扩增类志贺邻单胞菌 (Plesiomonas shigelloides)噬菌体 ФP4-7 裂解酶 gp2 基因并克隆至质粒 pQE30 上进行表达，重组蛋白采用 Ni-NTA 亲和层析法进行纯化．重组裂解酶 Gp2 最适反应 pH 为 9 ；裂解酶 40,℃ 保温 15,min ，酶活剩余 56.4%,．底物专一性实验结果显示，该裂解酶能够高效裂解 5 种革兰氏阴性菌，即铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌 (Escherichia coli)、粘质沙雷氏菌 (Serratia marcescens)、摩氏摩根菌 (Morganella morganii) 、弗氏柠檬酸杆菌 (Citrobacter freundii) ，以及 3 种革兰氏阳性菌，即金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、枯草芽胞杆菌 (Bacillus subtilis)、地衣芽胞杆菌 (Bacillus licheniformis)．杀菌实验结果表明，裂解酶 Gp2 可与 EDTA 、LAB-35 以及 SDS 配合使用，进一步提高该酶对铜绿假单胞菌和枯草芽胞杆菌的杀菌活性．裂解酶 Gp2 具有高效广谱裂菌活性，具有潜在的应用价值．关键词：噬菌体裂解酶；类志贺邻单胞菌噬菌体ΦP4-7 ；蛋白表达；杀菌活性中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1672-6510 (2017)03-0016-07 Characterization and Activity Determination of Gp2 Endolysin from Plesiomonas shigelloides Phage ФP4-7 HE Yang ，JING Zhaoyuan ，YANG Hongjiang (Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology ，Ministry of Education ，Tianjin Key Laboratory of