鸡传染性支气管炎病毒(M41株)血凝抑制试验抗原.docVIP

附件2（略） 附件3（略） 附件4 鸡传染性支气管炎病毒（M41株）血凝抑制试验 抗原、阳性血清与阴性血清等兽药产品说明书和标签 一、鸡传染性支气管炎病毒（M41株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书和标签 （一）鸡传染性支气管炎病毒（M41株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书 兽用 【兽药名称】 通用名 　鸡传染性支气管炎病毒（M41株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清 商品名 　无 英文名　 Infectious Bronchitis Virus( Strain M41) Hemagglutination Inhibition Test Antigen，Positive Sera and Negative Sera 汉语拼音　 Ji Chuanranxingzhiqiguanyan Bingdu（M41 Zhu）Xueningyizhishiyan Kangyuan, Yangxing Xueqing Yu Yinxing Xueqing 【主要成分及含量】 抗原系用A型魏氏梭菌滤液处理的鸡传染性支气管炎M41株浓缩病毒，血凝效价不低于1:128；阳性血清系用鸡传染性支气管炎M41株病毒接种SPF鸡制备的免疫血清，鸡传染性支气管炎M41株血凝抑制抗体效价应不低于1:128；阴性血清为SPF鸡血清。 【性状】 抗原为白色混浊液体，底部有少量沉淀；阳性血清及阴性血清为淡黄色或淡红色澄明或微浑浊液体，无沉淀。 【作用与用途】 用于鸡传染性支气管炎病毒（M41株）灭活疫苗血清学效力检验及免疫监测。 【用法与判定】 1 材料 1.1 96孔V型微量反应板、单道及多道微量移液器、吸头、加样容器、吸管、烧杯等。 1.2 HA缓冲液 将5.96g HEPES、8.19g氯化钠、0.15g氯化钙依次溶解于1000ml双蒸水中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液或盐酸溶液调至pH值6.5，用0.2(m微孔滤器滤过，分装，置2～8℃保存备用。 1.3 生理盐水 取9g氯化钠溶解于1000ml蒸馏水中，即成。 1.4 1%鸡红细胞悬液 采集公鸡血液（加入阿氏液抗凝），加入生理盐水，离心，洗涤5次，最后用HA缓冲液将血球泥稀释至1%（V/V）。 1.5 25%高岭土悬液 取高岭土25g，加水至100ml，再加入0.1mol/L盐酸溶液 250ml，摇匀，静置60分钟，弃上清，用去离子水反复洗涤至中性，置37℃，直至水份完全蒸发，用pH值7.2 PBS（0.01mol/L）配成25%悬液，置2～8℃保存备用。 1.6 抗原溶解 将冻存的抗原溶解后摇匀，待测HA。 2 操作术式 2.1 IB HI抗原HA试验操作方法 2.1.1 在96孔微量板上，从第1孔至第12孔，用加液器每孔加入HA缓冲液25(l。 2.1.2 取25(l HI抗原，从第1孔起，依次作2倍系列稀释至第12孔，混合，弃去25(l。 2.1.3 每孔加入25(l HA缓冲液。 2.1.4 每孔加入25(l 1%鸡红细胞悬液，每块板上设稀释液和红细胞悬液对照孔。 2.1.5 将微量板置振荡器上振荡30秒，置2～8℃作用45分钟，判定结果。 2.1.6 结果判定 将微量板倾斜45度。对照孔的红细胞应完全沉淀到孔底中心，呈泪珠样流淌，HA阳性孔的红细胞则均匀分布于孔底或呈锯齿样凝集。使红细胞完全凝集的最大稀释倍数为该抗原的HA效价。 2.2 IB HI工作抗原的配制 如果IB HI抗原凝集价测定结果为1:256（举例），则4个HA单位为1:64（256÷4=64），这时可将HI抗原用HA缓冲液稀释64倍，即成4 HA单位的工作抗原液。 2.3 IB HI试验操作方法 2.3.1 待检血清的处理 取0.1ml血清，加入0.3ml 25%高岭土悬液，混匀，置37℃ 60分钟，以6000r/min离心15分钟，取上清，即为1:4稀释的待检血清。 2.3.2 HI试验操作方法 2.3.2.1 在96孔微量板上，每行从第2孔开始，每孔加入25(l HA缓冲液，直至第12孔。 2.3.2.2 分别在第1、2、12孔中加入处理过的待检血清25(l。 2.3.2.3 用加样器从第2孔起作2倍系列稀释，直至第10孔（血清稀释倍数从第1孔的1:4、第2孔的1:8……至第10孔的1:2048），弃去25(l。 2.3.2.4 向第1～11孔中加入25(l 4 HA单位的抗原，在微量振荡器上振荡30秒，室温下作用30分钟。 2.3.2.5 每孔加入25(l红细胞悬液，振荡30秒，放2～8℃下反应30～45分钟，判定结果。 2.3.3 判定 判定时将微量板倾斜45度。只有当抗原对照孔（第11孔）中红细胞完全凝集、血清对照孔