亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T及A1298C多态及胃癌遗传易感性.docVIP

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T及A1298C多态及胃癌遗传易感性 　 作者：李松, 祭美菊, 侯鹏, 何农跃 [摘要]目的：探讨代谢叶酸的亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因单核苷酸多态与胃癌风险的关系。方法：以聚合酶链反应和限制性片段长度多态方法分析170例胃癌病人和性别、年龄配对的140例正常对照者的MTHFR基因C677T和A1298C基因型及其与胃癌风险的相关性。结果：在正常对照中，MTHFR基因677CC、CT、TT基因型频率分别为47.9%、40%和12.1%，而在胃癌病人中分别为35.9%、45.9%和18.2%。在病例组中677(CT+TT)变异型基因者占64.1％，显著高于对照组中的52.1％，差异具有显著意义（χ2=4.54，P ＜0.05）。与677CC基因型者相比,变异型基因者和TT型基因者发生胃癌的危险性分别高1.67倍（OR为1.67,95%CI为1.06~2.64）和2.67倍（OR为2.67,95%CI为1.382~5.341）。A1298C基因型在病例和对照中的分布差异无显著性意义。但进一步分析发现，1298变异基因型与677变异基因型之间有协同作用。携带MTHFR 677TT/1298AC基因型个体发生胃癌的风险是携带MTHFR 677CC/1298AA基因型个体的3.684倍 (95%CI为 0.829～25.776)。结论： MTHFR单核苷酸多态是胃癌的遗传易感性因素。 [关键词]胃癌；单核苷酸多态性；亚甲基四氢叶酸还原酶基因；疾病易感性 DNA 甲基化是基因表达，DNA 的稳定性、完整性和诱变的重要决定因素，染色体和DNA甲基化异常都是可遗传的，是导致基因组不稳定性而引发肿瘤的重要机制[1]。相关研究表明，细胞内低甲基化是胃癌形成的一个重要原因，亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)基因多态会影响叶酸在体内的正常代谢，造成甲基不足，从而促进胃癌的产生，国内外刊物报道了此方面进行的一些研究。MTHFR基因在总的人群中呈高度多态性，在其编码区有2个常见的单核苷酸多态,即C677T 和A1298C，前者位于催化区而后者位于活性调节区 [2]。作者对江苏南京地区的170例胃癌病人和140例相匹配的正常对照者进行研究，分析MTHFR基因C677T 和A1298C多态性与胃癌发生的风险性的关系。 1 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 标本来源 标本取自170例胃癌病人和140例正常对照者。病人分别来自东南大学附属中大医院、南京市鼓楼医院和江苏省人民医院，样品为肿瘤组织和外周血；年龄、性别相匹配的正常对照者来自东南大学校医院和东南大学附属中大医院，所取样品均为健康人的外周血。所有的病例和正常对照者均为江苏省南京市及其周边区域居住的汉族居民。病例组中男、女性分别为118例和52例，平均年龄为（52.05±10.67）岁；对照组男、女性分别为82例和58例，平均年龄为（50.87±7.69）岁。胃癌组和对照组性别、年龄分布差异无显著意义（P值分别为0.129和0.28），基因组DNA的提取采用标准的苯酚/氯仿法。 1.1.2 主要试剂 蛋白酶K、EDTA、TrisCl和饱和酚均为上海生工生物工程技术服务有限公司产品，限制性内切酶Hinf Ⅰ（10U#12539;μl-1）和Mbo Ⅱ（10U#12539;μl-1）为大连宝生物公司产品，所有的引物由上海博亚生物工程公司合成。 1.1.3 仪器 PTC225热循环仪（MJ Research, Watertown, MA），紫外分光光度计（岛津公司），凝胶成像系统（Syngene，Gene Genius）。 1.2 实验方法 1.2.1 MTHFR基因型分析 MTHFR基因分型按我们已报道的方法 [3]进行。扩增含C677TDNA片段的PCR引物序列为：F，5′TGA AGG AGA AGG TGT CTG CGG GA3′和R，5′AGG ACG GTG CGG TGA GAG TG3′，扩增产物长度为198bp。 扩增含A1298CDNA片段的PCR引物序列为：F，5′CTT TGG GGA GCT GAA GGA CTA CTA C3′和R，5′CAC TTT GTG ACC ATT CCG GTT TG3′， 扩增产物长度为163bp。 30μl反应体系包括：200μg#12539;ml-1DNA模板1μl ，双侧引物各1μl，10×缓冲液3μl，25mmol#12539;L-1的Mg2+ 2μl，10mmol#12539;L-1的dNTP 0.6μl, 1.25U的TaqDNA聚合酶（5U#12539;μl-1）。反应条件：94℃预变性