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β受体阻滞剂普奈洛尔对大鼠脑创伤后脑组织中IL1β及IL1Ra 　 作者：仇威富 白祥军 唐朝晖 【摘要】 目的 探讨β受体阻滞剂（普奈洛尔）对大鼠脑创伤后脑组织中白细胞介素1β（IL1β）和白细胞介素1受体拮抗剂（IL1Ra）的影响。方法 选取SD大鼠72只，随机分为对照组（36只）、治疗组（36只）。采用改良的Feeney法致大鼠右顶叶脑创伤模型, 分别给予生理盐水、普奈洛尔腹腔注射(40mg/kg）。每组于致伤后6、24、72小时3个时相点，取右顶叶损伤区脑组织，苏木精伊红染色（HE染色）法观察其病理变化，免疫组织化学和免疫印迹（Western blotting）方法检测其中IL1β和IL1Ra的表达。结果 对照组：伤后6小时即可见变性坏死神经元，且IL1β有大量表达，24小时达高峰；IL1Ra有极少表达并逐渐升高。 治疗组：变性坏死神经元明显减少，IL1β表达降低；而IL1Ra 6小时即有明显表达并持续至72小时；且IL1β/IL1Ra比值较对照组降低。两组比较，差异具有统计学意义(Plt;0.05)。结论 β受体阻滞剂能明显降低大鼠脑损伤区IL1β表达、提高IL1Ra表达，可能对减轻大鼠脑创伤后炎性损伤具有一定作用。 【关键词】 普奈洛尔 颅脑损伤 大鼠 白细胞介素1β 白细胞介素1Ra 研究表明，白细胞介素1β（IL1β）作为一种促炎性细胞因子参与脑创伤后炎性反应［1］。Woiciechowsky等［2］研究证实β受体阻滞剂可阻断IL1β引发的中枢神经系统炎性反应。白细胞介素1受体拮抗剂（IL1Ra）是脑组织中天然存在的、能降低IL1β炎性损伤的拮抗剂。基于此，本研究旨在探讨β受体阻滞剂(普奈洛尔)对大鼠脑创伤后脑组织中IL1β和IL1Ra表达的影响及其机制。 　　材料与方法 　　1 实验材料 　　健康雄性SD大鼠72只，体重(250±20)g（购自同济医学院实验动物中心）。β受体阻滞剂选取普奈洛尔（湖北华中药业有限公司,武汉），IL1β单克隆抗体（博士德公司，武汉），IL1Ra单克隆抗体（Santa Cruz公司，美国）。大鼠脑立体定位仪、手术器械等。 　　2 动物分组与模型制作 　　大鼠随机分为对照组(36只)和治疗组(36只)，每组分别观察创伤后6、24、72小时3个时相点，各时相点大鼠12只，随机选取6只分别进行免疫组织化学和免疫印迹（Western blotting）实验。按改良的Feeney法（击锤重40g，底面直径约4mm，15cm高处自由落体）致大鼠右顶叶脑创伤模型。自伤前0.5小时起每日1次，治疗组给予普奈洛尔（40mg/kg）腹腔注射治疗，对照组给予等量生理盐水［3］。 　　3 标本采集及实验方法 　　3.1 SP法 大鼠经麻醉、开胸、左心室插管，4％多聚甲醛液灌注45～60分钟后取出大鼠脑组织块，石蜡包埋切片，进行苏木精伊红染色（HE染色）观察病理变化及免疫组化观察损伤区域脑组织中的IL1β和IL1Ra表达变化情况。用彩色图像分析系统（HPISA1000高清晰度彩色病理图文分析系统）对免疫组化染色的阳性细胞进行定量分析，选平均光密度（ODI）作统计指标。 　　3.2 Western blotting实验 （1）组织蛋白提取：大鼠麻醉后，立即断头处死，迅速取出损伤区域脑组织，剪碎后用生理盐水洗去表面血液；加入裂解液A中,浸泡5分钟,转移入二倍体积的裂解液B,电动匀浆9000转3分钟,浸泡30～60分钟。超声振荡3分钟,低温离心12000r/min,20分钟，取上清液-80℃保存,待用。（2）十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）及转膜：取上清于10％SDSPAGE后，将蛋白通过湿式电转移到硝酸纤维素(NC)膜上。（3）加一抗［封闭液稀释，IL1β浓度1:400，IL1Ra浓度1:300，β肌动蛋白（βactin）浓度1:800，4℃孵育过夜；然后将硝酸纤维素膜置于辣根过氧化物酶（HRP）标记的相应二抗溶液中室温1小时，显色曝光。胶片条带经扫描、编辑和打印。用分析软件Bandscan4.3，对每个目的条带进行总灰度分析，βactin为内参照，以IL1β、IL1Ra与βactin的积分光密度比值代表其相对表达水平。 　　4 统计学处理 　　数据以±s表示，统计分析采用SPSS13.0统计软件进行组间t检验。Plt;0.05为差异有显著性意义。 　　结果 　　1 病理形态学观察 　　光镜下观察，对照组6小时显示损伤灶蛛网膜下腔出血，神经元变性坏死，胶质细胞呈空泡样变性，血管内有明显白细胞聚集和附壁现象，脑细胞水肿明显；24小时后坏死神经元增多，多发散在血管周围出血。治疗组脑细胞水肿明显减