P21、P53、PCNA在膀胱癌中表达及意义.docVIP

P21、P53、PCNA在膀胱癌中表达及意义 　　膀胱癌是泌尿系中最常见的一种恶性肿瘤。单个癌基因蛋白产物或抗癌基因蛋白产物与膀胱癌发生的相关性研究已有报道，而有关同一浸润性膀胱癌标本多个癌基因蛋白产物或抗癌基因蛋白产物表达规律的研究报道较少。作者用免疫组化方法检测浸润性膀胱癌中P21、P53、PCNA的表达水平，以探讨膀胱癌发病机制，找出癌基因蛋白产物、抗癌基因蛋白产物和PCNA表达与膀胱癌生物学行为的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 　　收集本院1996年1月至2006年12月手术切除的膀胱癌标本29份，石蜡包埋，常规切片，经病理确诊为移行上皮癌［１］，其中高分化（I级，II级）13例，低分化（Ⅲ级，Ⅳ级）16例。另取前列腺增生患者正常膀胱黏膜5份。 　　1.2 试剂 　　P21、P53、PCNA单克降抗体为丹表DAKO公司产品。生物素化马抗鼠IgG及ABC试剂为美国VecterLabs产品，胰蛋白酶为丹麦DAKO产品。 　　1.3 方法 　　（1）切片经脱蜡，梯度酒精水化加P21，P53或PCNA（1：50）单抗，60min后4℃过夜；（2）加生物素化与抗鼠IgG（1：200）30min；（3）加ABC试剂（1：100）60min；（4）0.4%D-NA-H2O2中显色5min；（5）苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明树胶封片。以TBS缓冲液替代单抗作对照染色。细胞膜或细胞核有棕包颗粒着色为阳性标记,根据阳性细胞百分比分5个等级：阳性细胞数lt;5%为０分；5～25％为1分；26～50%为2分；51～75％为３分；gt;75％为4分，染色强度分为：0分为无色；1分为淡黄色；2分为棕色；3分为棕褐色，总分计算方法为：阳性细胞数分值乘以染色强度所得分值的乘积，总分0-1分为阴性（-），2-5分为轻度阳性（+），6-8分为中度阳性（），9-12分为重度阳性（）。 　　1.4 统计学处理 用卡方检验法。 　　2 结果 29例膀胱癌中有18例P21蛋白表达阳性（62.1%）16例P53蛋白表达阳性（55.2%），17例PCNA表达阳性（58.6%）。正常膀胱组织及癌旁组织中P21，P53和PCNA表达均阴性。阳性信号为棕黄色，P53和PCNA阳性表达存在于肿瘤细胞核内；P21蛋白阳性表达存在于细胞膜上。P21，P53和PCNA阳性率表达在16例低分化癌中分别为75%（12例），75%（12例），及81.3%（13例）与13例高分化癌31.5%（4例），25%（3例）及23%（3例）间差异有显著性（P＜0.05）；P21，PCNA和P53阳性表达在12例临床早期41.7%（5例），33.3%（4例）及33.3%（4例）与17例临床晚期为100%（17例）100%（17例）及85.7%（14例）间差异亦有显著性(P＜0.05）。 　　　3 讨论 ras 癌基因家族共同编码的蛋白P21蛋白是胞浆内参与跨膜信号传递的主要物质。它对细胞生长刺激信号起调节作用。当ras基因发生突变时，细胞内的信号持续传递导致细胞无限制生长并引起癌变［２］。Agnantis等［３］研究42例膀胱癌患者，发现癌组织中P21蛋白阳性表达明显高于癌旁正常组织。作者用免疫组化检测29例浸润性膀胱癌标本。结果表明：膀胱癌组织中P21阳性表达率为62.1%，对临床资料分析表明，本组膀胱癌中P21阳性表达与肿瘤临床分期，病理分级和患者的术后生存期有关：病理分化差、临床分期晚的患者P21蛋白表达率高，并且术后生存期短。提示P21蛋白阳性表达可能作为预测膀胱癌预后的客观指标之一。P53基因编码的53000的核酸蛋白，参与细胞生长的负调节，是肿瘤抑制基因。野生型P53蛋白半衰期仅6～20min，一般免疫组织化方法难以测出，突变形P53蛋白半衰期较长，常在细胞核内聚积，因此，用免疫组化检测到的P53蛋白均为突变形P53蛋白［４］。Carlos等［５］用免疫组化法研究42例膀胱癌，结果发现26例标本中有P53蛋白的高表达。Sarkis等［６］认为P53蛋白阳性表达与膀胱癌的预后有关。一些研究显示，在膀胱癌中可见P53抑癌基因突变的同时常伴有17号染色体短臂的等位缺失。作者用免疫组化方法检测29例膀胱癌标本，结果表明55.2%的肿瘤组织中有P53蛋白的高表达，且随着膀胱癌恶性度的进展，P53蛋白阳性表达率也愈高。提示P53蛋白阳性表达与膀胱癌生物学行为关系密切。 PCNA是一种与细胞周期相关的36000蛋白，是从细胞核内分离纯化的一种多肽链，能与DNA多聚酶辅助蛋白结合，参与细胞DNA的复制，其表达水平与肿瘤细胞增值有关，浸润性膀胱癌中PCNA明显高于浅表性膀胱癌［７］。本组膀胱癌中PCNA阳性率58.6%，且多发生在膀胱癌晚期和分化差的肿瘤中，经随访其高表达者