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北豆根提取物中有效成分分析方法建立 　 作者：朱孝芹， 韩铁刚， 张欢， 刘翠哲 【摘要】 　　目的采用酸性染料比色法测定北豆根提取物中北豆根总碱（ＴＡＭＤ）的含量，采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定蝙蝠葛碱（Ｄａｕｒｉｃｉｎｅ）的含量。方法溴甲酚绿在无水甲醇（ｐＨ ＝６）中，可与ＴＡＭＤ 直接络合生成绿色化合物，用于比色测定，最大吸收波长为６２０ ｎｍ。ＨＰＬＣ 法，色谱柱：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｃ１８ 柱；流动相：乙腈∶水∶磷酸＝１６∶８４∶０．１５；流速：０．５ ｍｌ·ｍｉｎ－１ ；检测波长：２０８ ｎｍ。结果酸性染料比色法：线性范围为６ ～４０ μｇ· ｍｌ－１ ，r ＝０．９９９ ８ （n ＝７），平均加样回收率为９９．１８％，RSD ＝０．７４％；ＨＰＬＣ 法：线性范围为０．０１ ～０．１ ｍｇ· ｍｌ－１ ，r ＝０．９９９ ８（n ＝７） ，平均加样回收率为９８．３２％， RSD＝０．９４％。结论建立的方法灵敏、准确、重现性好，可作为北豆根提取物中ＴＡＭＤ 和蝙蝠葛碱的含量分析方法。 【关键词】 北豆根总碱 蝙蝠葛根 酸性染料比色法 高效液相色谱法 　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ａｃｉｄ ｄｙｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒic ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ａｌｋａｌｏｉｄ in Menispermum dauricum（ＴＡＭＤ）， ａn ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄａｕｒｉｃｉｎｅ ．MethodsＴＡＭＤ ｐｒｏｄｕｃｅd ｇｒｅｅｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｂｒｏｍｏｃｒｅｓｏｌ ｇｒｅｅｎ iｎ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｈｙｄｒａｔｅｄ ｅｔｈａｎｏｌ ， ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｉｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ， ａｃｉｄ ｄｙｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ． ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ ａ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ －Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（２５０ ｍｍ ×４．６ ｍｍ，５ μｍ）， ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ －ｗａｔｅｒ －ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ（１６∶８４∶０．１５）， the flow rate was ０．５ ｍｌ· ｍｉｎ－１ ， ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ wavelength was ２０８ ｎｍ．ResultsＡｃｉｄ ｄｙｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒic ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｗａｓ ６ ～４０ μｇ· ｍｌ－１ ， r ＝０．９９９ ８（n ＝７）， ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒy ｗａｓ ９９．１８％ ｗｉｔｈ ｔｈｅ RSD ｏｆ ０．７４％. ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｗａｓ ０．０１ ～０．１ ｍｇ· ｍｌ－１ ， r ＝０．９９９ ８（n ＝７） ,ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒy ｗａｓ ９８．３２％ ｗｉｔｈ ｔｈｅ RSD ｏｆ ０．９４％．ConclusionＴｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ， ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ， ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＴＡＭＤ ａｎｄ Ｄａｕｒｉｃｉｎｅ ｉｎ ＲＭ ｅｘｔｒａｃｔ． 　　Key words：Ｔｏｔａｌ ａｌｋａｌｏｉｄ in menispermum dauricum（ＴＡＭＤ）； Ｄａｕｒｉｃｉｎｅ； Ａｃｉｄ ｄｙｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ； ＨＰＬＣ 　　北豆根为防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauricum ＤＣ．的干燥根茎，其有效部位是生物碱。现已知北豆根中含有近２０ 种生物碱，总碱含量可达１％以上，其中含量最高的生物碱为蝙蝠葛碱，其含量约占总生物碱的５０％左右［１］ 。北豆根总碱（ＴＡＭＤ）对呼吸道致病菌有抑菌作用，尤其对肺炎球菌效果更为显著。其制剂北豆根片可治疗急性咽炎、扁桃体炎，经过多年的临床应用已收入２００５ 版《中国药典》。２００５ 版《中国药典》用酸碱滴定法控制含量，终点不易判断，误差大。本实验采用酸性染料比色法测定提取物中ＴＡＭＤ 的含量，采用高效液相色谱法测定提取物中蝙蝠葛碱的含量，从而用这两个指标控制提取物的质量。 　　１ 　器材 　　ＨＰ －８４５３ 紫外－可见分光光度计；ＡＧ －２５４ 型电子分析天平（瑞士梅特勒）；ＷＴ －０２ 型电热恒温干燥箱（北京恒星医疗器械厂）；ＺＦＱ －８５Ａ 型旋转蒸发仪（上海医械专机厂）