12 2015-06 无菌检查方法验证表和检查记录表.docVIP

无菌方法验证 品名： 规格： 批号： 检查时间： 1.培养基：硫乙醇酸盐流体培养基，批号： 由： 提供； 营养肉汤， 批号： 由： 提供； 改良马丁培养基 批号： 由： 提供。 2.验证试验用菌种：(1) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26003]；(2) 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63501]； (3) 大肠埃希菌（Escherichia coli） [CMCC(B) 44102]；(4) 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104](5) 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B) 64941]；(6) 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 98001]； (7) 黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F)98003]。 仪器和滤器：集菌仪.1 菌液制备： 取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中, 生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中,培养小时 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌生孢梭菌肉汤培养物，加生理盐水，10倍稀释至约10-5~10-8之间铜绿假单孢菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中,培养小时取白色念珠菌真菌斜面培养物，加入生理盐水洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，取加生理盐水，稀释至，取加生理盐水，混匀备用将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至改良马丁培养基上，培养，使大量的孢子成熟。取黑曲霉真菌斜面培养物，加入生理盐水洗下孢子，吸出转移至空试管作为原液，稀释至，取加生理盐水混匀备用.2 菌液计数：分别取上述5种细菌菌液加入硫乙醇酸盐流体培养基，每种菌液做平行。培养。 分别取上述2种真菌菌液加入改良马丁培养基中，每种菌液做平行。培养。细菌和真菌数计数结果分别见表1和表2。表1 ????细菌数计数 菌 种 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌 生孢梭菌 计数(CFU) 均值(CFU) 表2 ???真菌数计数结果 菌 种 黑曲霉菌 白色念珠菌 计数(CFU) 均值(CFU) 硫乙醇酸盐流体培养基肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌生孢梭白色念珠菌黑曲霉菌硫乙醇酸盐流体培养基菌 种 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌 生孢梭菌 CFU 阴性对照 表4 改良马丁培养基菌 种 黑曲霉菌 白色念珠菌 CFU 阴性对照 6. 供试液制备：. 薄膜过滤：将供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，每次，在最后一次的冲洗液中逐一加入试验菌少于100CFU。按规定将培养基直接加至滤筒内。每天观察并记录结果。.1 阳性对照：大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基白色念珠菌黑曲霉菌.2 阴性对照：两个滤器桶内各过滤，然后分别加入硫乙醇酸盐培养基和培养基，不加对照菌液，分别培养。 . 培养：硫乙醇酸盐流体培养基培养；培养基培养。. 结果 .1 实验结果见表和表。 ? 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌 生孢梭菌 冲洗量ml 冲洗量ml ? 阳性对 阴性对照 表? ?细菌实验结果 (20小时观察) 表???? 36小时观察真菌结果 ? 黑曲霉菌 白色念珠菌 冲洗量ml 冲洗量ml 阳性对照 阴性对照 10.结论： 检验人： 复核人： 结 论 阴性对照 阳性对照 改良马丁培养基硫乙醇酸盐流体培养基 1 2