高通量测序样品处理推荐流程-锐博生物.pdfVIP

高通量测序样品处理推荐流程 1.1 DNA 样品处理 1.2 RNA 样品处理 1.3 Exosomes 相关样品的处理（锐博提供相关提取服务） 点击查看 1.1 DNA 样品的处理 1.1.1 组织干重：≥500mg/ 样品。（注：不同类型的样品产量差别较大，具体送样量以达到质检要求为准。） 新鲜剥离样品，快速清洗，分割 (1) 对于进行 DNA 提取的样品，须置于无 DNase 器皿中，速冻存于 -20℃以下。 提前 2 小时冰上预冷生理盐水或 PBS； 从活体切取所需组织，置于冰上平皿内；加入预冷的生理盐水或 PBS 至淹没组织，漂洗去除血渍污物，重复 1 次； 用滤纸吸干样品表面液滴，剪成约 0.3cm 左右的小块（如绿豆大小，组织块越小，保存效果越好）； 液氮速冻后用封口膜封口（组织离体后至液氮速冻，操作时间不宜超过 3min）。 (2) 运输方式：72 小时内干冰运输。 1.1.2 贴壁或悬浮细胞：≥8×106 细胞 / 样品。（注：不同类型的细胞产量差别较大，具体送样量以达到质检要求为准。） (1) 对于进行 DNA 提取的样品，须速冻存于 -20℃以下。 冰上预冷 PBS（器皿、移液器枪头、离心管等无 DNase）； a) 贴壁细胞：用胰酶处理细胞后，进行离心收集，最后用预冷的 PBS 缓冲液洗涤一次，去除 PBS，液氮速冻。 b) 悬浮细胞：离心收集细胞，弃培养液，用预冷 PBS 漂洗一次，液氮速冻。 液氮速冻后用封口膜封口。 (2) 运输方式：72 小时内干冰运输。 1.1.3 微生物：50mg（注：不同类型的样品产量差别较大，具体送样量以达到质检要求为准。） (1) 建议选取处于对数生长期的菌液，高速离心收集菌体后，弃上清后菌体于液氮速冻后用封口膜封口。 (2) 运输方式：72 小时内干冰运输。 注：推荐客户分装备份所有寄送样品，以便用于样品检测不合格时分析原因。 表 1. DNA组织送样量 分析类型 RRBS Exon 其他常规 DNA测序类型 新鲜动物组织 1-2 g 500 mg 500 mg 新鲜植物组织 2 g 2 g 1 g 新鲜培养细胞 9 x 106 8 x 106 8 x 106 全血 5mL 2 mL 1 mL Meta样品（粪便、土壤等） -- -- 2 g 干重 -- -- 50 mg 菌 菌液 -- -- 5 mL 注：全血样本需要使用 EDTA抗凝的采血管收集样品（由于会影响实验，不能使用肝素抗凝），冷冻后，干冰运输送样。 1.2 RNA 样品的处理 1.2.1 ≥350mg/ 样品。（注：不同类型的样品 RNA 产量差别较大，具体送样量以达到质检要求为准。） 新鲜剥离样品，快速清洗，分割， (1) 对于进行 RNA 提取的样品，推荐处理方法如下： 提前 2 小时冰上预冷生理盐水或 PBS （所用溶液需用DEPC 处理过的水配制，器皿无 DNase 及 RNase ）； 从活体切取所需组织，置于冰上平皿内；加入预冷的生理盐水或 PBS 至淹没组织，漂洗去除血渍污物，重复 1 次； 用滤纸吸干样品表面液滴，剪成约 0.3cm 左右的小块（如绿豆大小，组织块越小，保存效果越好）； a) 无保护液：剪碎的组织样品直接液氮速冻用封口膜封口（组织离体后至液氮速冻，操作时间不宜超过 3min ）。 b) RNAlater ：放入加有 5 倍体积 RNAlater 的离心管或冻存管中（RNAlater 需在 4°C 下过夜以允许溶液渗透进 入组织）； 液氮速冻后用封口膜封口（组织离体后至液氮速冻，操作时间不宜超过 3min ）。 c) trizol ：如果