唾腺染色体.pptVIP

2012年 1 2 3 4 5 2013年泰山学堂 2013年泰山学堂 2013年基地班 2014年基地班 ？ 1 2 3 4 5 2015年泰山学堂 教材用图 果蝇唾腺染色体 标本制备和观察 实验二 练习解剖果蝇幼虫的技术 掌握果蝇唾腺染色体的制片方法 了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点 一、实验目的 二、实验原理 果蝇为双翅目完全变态的昆虫, 幼虫期分三龄。 果蝇的生活史 卵 一龄幼虫 二龄幼虫 三龄幼虫 蛹 成虫 果蝇幼虫期具有很大的唾腺细胞，其中的染色体是巨大的唾液腺染色体； 唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开，经过许多次的复制形成约1000～4000拷贝的染色体丝，合起来达5?m宽，400?m长，比普通中期相染色体大得多（约100～150倍），所以又称为多线染色体。 果蝇唾腺染色体特点： 巨大，是多线染色体；有丝分裂停在间期，DNA不断复制，着丝点不裂开 同源染色体紧密配对：体细胞联会，染色体呈单倍数； 各染色体的着丝粒区域(异染色质)互相靠拢形成染色中心,从染色中心伸出5条染色体臂。 果蝇的唾腺染色体是4对，存在体联会。各染色体的着丝粒互相靠拢形成染色中心。 一对X 染色体的着丝粒在端部，看上去从染色中心伸出一条臂。 第 2 对和第 3 对染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心各自向外伸出2各臂（2L，2R，3L，3R）。 短小的第 4 染色体成点状，不易看到。 因此在显微镜下，最容易识别的只有5 条染色体臂。　 4 2L 2R 3L 3R X 雄果蝇的 Y 染色体几乎包含在染色中心里，因为是异染色质，看起来染色可能淡些。有经验的人可以发现雄果蝇的 X 染色体比雌果蝇 X 染色体要细些，因为雄性只有一条 X 染色体。 染色后，出现一系列宽窄不同、染色深浅不一的横纹，这意味着基因的排列。唾腺染色体上的横纹宽窄、浓淡是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，这称为疏松区（puff），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。 此处未发生体联会 模 式 图 唾液腺染色体具有许多重要特征，为遗传学研究的许多方面，如染色体结构、基因差别表达等提供了独特的研究材料（理论课将详细介绍） 唾腺染色体（salivary gland chromosome）在遗传学研究中的应用： 果蝇唾腺染色体上的缺失环 三、实验用具及材料 黑腹果蝇（或普通果蝇）的三龄幼虫　 双筒解剖镜　显微镜　解剖针　 生理盐水　改良苯酚品红染液 一龄虫 两龄虫 三龄虫 四、实验步骤 1、选取幼虫 （获取较多、较大幼虫的方法：低温培养、大场地、富营养、多亲本） 2、腺体剖取： 取行动迟缓、肥大，爬上管壁的三龄幼虫，置于载玻片上，并滴加一滴生理盐水，观察幼虫结构：具一钝尾和带黑色口器的尖头端 ； 取两支解剖针，一针压住幼虫身体的近中部，固定幼虫，另一针压住幼虫头部，压点尽可能靠头部口器处。 将解剖针平稳前移，使头部与身体拉开，体内各器官从切口拉出，一对唾腺也随之而出。（唾腺为单层细胞，有明显的界限，注意腺体千万不能干掉） 唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。 为什么要剥离脂肪体？---------影响染色效果。 3、腺体解离（可以省略HCl解离）： 加1滴1N HCl，浸2—3分钟，使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体散开； 用吸水纸吸去HCl，加蒸馏水轻轻冲洗两次，小心吸干（注意操作时要边观察边吸水，防止连同唾腺一起吸走）。 也可以省略HCl解离，直接加1滴蒸馏水进行低渗处理几分钟，然后吸掉水分。 滴加改良苯酚品红染液，染色20-30min。 染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用大拇指均匀用力压片。（注意不要使盖片滑动，可以朝一个方向揉动，不要来回揉！） 4、染色与压片 5、观察标本　 先用低倍物镜观察片子，找到好的染色体图像 后，放到视野中心，再用高倍镜观察。 1. 一定加生理盐水，否则唾腺易干。 2. 尽量将脂肪组织清除干净 3. 吸水时勿将唾腺一起吸走 4. 水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃 5. 染色时间不可过长，否则背景也着色 6. 压片时用力要均匀 五、注意事项 六、作业与思考 1.每人制1张染色体分散、横纹清晰的临时装片。 2.绘制你在显微镜下所看到的果蝇唾腺巨染色体图。 3.什么是染色中心（chromocenter）? 4.根据你所学的知识，联会（synapsis）应出现在什么类型的细胞中？ 5.分析自己制片操作过程中出现的问题及可能原因。 2010年 2010年 2011年