谷氨酰胺对缺血再灌注肝脏热休克蛋白70基因表达的影响.docVIP

　　谷氨酰胺对缺血再灌注肝脏热休克蛋白70基因表达的影响 ：刘国平，冯晓东，朱闻溪，杨广顺，周文平，程广明 【摘要】 目的 探讨谷氨酰胺（Gln）对缺血再灌注肝脏热休克蛋白70（HSP70）基因表达的影响及其对肝脏的保护作用。方法 雄性DA）的含量，采用RTPCR法检测肝组织HSP70mRNA的表达。结果 再灌注后2、4、24小时，3组MDA、ALT、AST、LDH及TNFα水平与2组相比均显著降低（Plt;0.05），而3组肝组织HSP70mRNA表达显著高于2组和1组（Plt;0.05）。结论 Gln能够促进肝组织HSP70基因的表达，减轻肝缺血再灌注损伤，抑制炎症因子释放。 【关键词】 热休克蛋白70；谷氨酰胺；缺血再灌注；肝脏 Abstract： Objective To investigate the influence of Lglutamine on the expression of HSP70mRNA in liver and its protective role against ischemia/reperfusion damage.Methods One hundred and tale DA in liver tissue easured.The levels of serum TNFα concentrations of ALT,AST,LDH istry autoanalyser.The expression levels of HSP70mRNA in hepatic tissue erase chain reaction.Results pared RNA expression in liver from group 3 group 1 and group 2 at 2hours,4hours,24hours after reperfusion(Plt;0.05).Conclusion Gln presupplement could alleviate the ischemia/reperfusion injury of liver and inhibit the release of proinflammatory factors after the pringle′s method,ight be related oting the expression of HSP70mRNA. Key ine;ischemia reperfusion;liver 通过启动内源性保护反应来增强肝脏本身的耐受性，是减轻缺血再灌注损伤最理想的方法。热休克蛋白（HSP）是一种细胞自我保护性蛋白，促进HSP表达是启动内源性保护反应的关键所在。目前，对于预防性应用谷氨酰胺（Gln）是否可促进HSP70表达和减轻机体继发性损害报告甚少，且存在着争议［1-3］。其作用机制如何也不明确。因此，本研究拟探讨Gln对缺血再灌注肝脏HSP70基因表达的影响及其作用。 材料与方法 1 实验动物分组及处理 雄性DA）及HSP70mRNA表达的测定。 2 主要试剂 LGln(上海康达氨基酸厂)；MDA及总蛋白定量试剂（双缩脲）（南京建成生物研究所），试剂配置序号参照说明书；TNFα采用夹心法ELISA检测试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)测定；大鼠HSP70引物参照Genebank［TaKaRa（大连）公司合成］序列为（扩增片段为354bp）：5’AACGTGCTGCGGATCATCAA3’（上游引物）,5’CTGGATGGACGTGTAGAAGT3’（下游引物）；内参照磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）引物［TaKaRa（大连）公司合成］序列为（扩增片段为528bp）：5’ACCACCATGGAGAAGGCCGG3’（上游引物）,5’CTCAGTGTAGCCCAGGATGC3’（下游引物） ；Trizol总RNA提取试剂（美国Promega公司）；逆转录试剂盒、DNA Market(M)及PCR扩增所需的其他试剂［TaKaRa（大连）公司］；电泳用聚丙烯酰胺、三羟甲基氨基甲烷（Tris）及琼脂糖等（上海化工生物工程公司）。 3 检测方法 血清ALT、AST、LDH含量采用岛津CL7150全自动生化分析仪测定；血清TNFα、肝脏MDA含量分别采用ELISA方法、硫代巴比妥酸法测定，操作步骤按试剂盒说明书进行；每组在各个时点分别随机选取5只大鼠的肝标本，采用RTPCR法检测肝组织HSP70mRNA的表达。 4 统计学处理 数据结果均以均值±标准差表示，统计学差异性检验采用SPSS11.5统计软件进行完全随机设计方差分析，样本之间采用LSD法进行两两比较。 2