DB21∕T2099—2013贴梗海棠组培快繁技术规程.docVIP

ICS6.5.020.40 B 60 DB21 辽宁省地方标准 DB 21/T XXXXX—2012 贴梗海棠组培快繁技术规程 2012 - XX - XX发布 2013 - XX - XX实施 辽宁省质量技术监督局发布 目次 前言 II 1　范围 1 2　规范性引用文件 1 3　术语和定义 1 4　外植体的采集与处理 2 5　培养基的配制 3 6　接种 4 7　培养条件 4 8　试管苗炼苗 5 9　试管苗驯化 5 10　试管苗移栽 5 11　定植 6 附录A（资料性附录）　MS 7 附录B（资料性附录）　 8 附录C（资料性附录）　23号） 10 参考文献 12 前言 本标准依据GB/T 1.1-2009的规则起草。 本标准的附录A附录和附录为资料性附录。 本标准由辽宁省林业厅提出并归口。 本标准负责起草单位：辽宁省林业科学研究院。 本标准主要起草人：马冬菁、陈罡、叶景丰、魏忠平、刘红民、卜鹏图、王军、陈丽静、王宇、祁爽、潘文利、范俊岗。 本规程规定了贴梗海棠（Chaenomeles speciosa）组培快繁殖技术，具体包括外植体的采集与处理、培养基的配制、接种、培养条件、试管苗炼苗、试管苗驯化、试管苗移栽定植。 本标准适用于贴梗海棠的组培快繁育苗。 primary culture 将灭过菌的外植体接种于琼脂培养基上，诱导出愈伤组织或芽的培养过程。 3.2 增殖培养 proliferation cultrue 将培养材料周期性地分株、分割后转接入新鲜培养基中继续培养的过程。 3.3 增殖系数 proliferation coefficient 一个培养周期内试管芽增殖倍数，即单芽培养一个周期后的平均增殖芽数。 3.4 壮苗培养 healthier seedlings culture 将增殖的丛生芽苗切分成单芽，转接入新鲜培养基中，使之生长茁壮的培养过程。 3.5 生根培养 rooting cultrue 诱导无根试管苗产生根的过程。 3.6 试管苗 seedlings in vitro 通过植物组织培养产生的离体小植株。 3.7 组培苗 seedlings of tissue culture 试管苗经过驯化后产生的完整植株。 3.8 丛生芽 proliferation bud 由多个基部相连的离体小芽组成的一团芽。 3.9 试管苗炼苗 domestication of seedlings in vitro 将试管苗及培养容器一起移至室外近自然环境中培养的过程。 3.10 试管苗驯化 acclimination of seedlings in vitro 炼苗后的试管苗，移栽到驯化基质中的过程。 3.13 试管苗移栽 transplantation of seedlings in vitro 将驯化后的组培苗种植到温室或扦插棚移栽基质中，生长健壮并逐渐适应自然条件下生长的过程。 3.14 定植 planting 将移栽后的组培苗种植在圃地的过程。 外植体的采集与处理 外植体的采集 月～月，选择连续3天以上的晴天，选取2年～3年生优良母树，采取无病虫害的幼嫩枝条做为外植体。 当天采集，当天处理。若需长途运输，需备好装有冰块的保鲜盒以保存外植体。 外植体消毒 将取回的外植体枝条剪去叶片，将其切成3cm～5cm的茎段，流水冲洗2h～3h，用15倍液新洁尔灭浸泡2min~3min，然后用清水冲洗干净。再切分顶芽、茎段，并用蒸馏水冲洗3次～4次，转至无菌室。 在超净工作台上，将切好的茎尖、茎段用75%的乙醇浸泡30s后，用无菌水冲洗3次。 用0.1%升汞消毒液浸泡材料（茎尖3min～5min，茎段6min～8min）后，用无菌水冲洗6次～8次并无菌滤纸吸干水分后，切成1cm～2cm的顶芽或单芽茎段备用。 使用的升汞消毒液应按照国家有关剧毒化学药品使用的法规进行处理，可参见《医疗用毒性药品管理办法》（中华人民共和国国务院第23号令）。 0.1%升汞称取1g升汞，加蒸馏水溶解，定溶至1L。培养基的配制 培养基的选择 诱导培养基为MS+6-BA1mg·L-1+NAA0.2mg·L-1；继代培养基为MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.mg·L-1；壮苗培养基为MS空白培养基（MS0）；生根培养基为1/2MS+IBA0.3mg·L-1+NAA0.2mg·L-1。 MS培养基母液的配制和保存 制作培养基前需先配制培养基母液，MS培养基母液配制比例参见附表。 母液配制应用蒸馏水或白开水。 配制大量元素母液时，每个组分应单独溶解，然后按氮、磷、钙、镁的顺序逐一混合。 母液应置于冰箱内保存，温度控制在0～4℃。微量元素母液应用棕色瓶保存。母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过3个月。 母液容器上应贴好标签，注