DB21∕T2049—2012动物尿液中9种β—受体激动剂检测液相色谱—串联质谱法.docVIP

ICS65.120 B46 备案号： DB21 辽宁省地方标准 DB 21/ XXXXX—XXXX 动物尿液中9种β-受体激动剂检测 动物尿液中9种β-受体激动剂检测 液相色谱-串联质谱法 Determination of β-receptor agonists in animal urine Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施 辽宁省质量技术监督局发布 前言 本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。 本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。 本标准主要起草人：王丽娜 刘凯 刘笑 陈玉艳 杜柏林 田晓玲 郝利忠 张明 刘敬先 徐丽佳 苗翠 李楠 动物尿液中9种β-受体激动剂检测 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了动物尿液中苯乙醇胺A、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、西布特罗、喷布特罗9种β-受体激动剂的原理、、、操作方法、测定方法。 本标准适用于动物尿液中苯乙醇胺A、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、西布特罗、喷布特罗9种β-受体激动剂残留检测；本标准为确证方法，方法检测限为0.1μgL，方法定量限为0.2μgL。GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法。 样品经酶解后，加入高氯酸沉淀蛋白，离心后用固相萃取小柱净化，洗脱浓缩后用含0.2%甲酸水溶液溶解，供液相色谱-串联质谱仪进行检测，内标法定量。-20 ℃以下贮存。样品使用前放至室温，如有浑浊，离心后取上清液备用。除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯。水应符合GB/T 6682一级水的规定。甲醇：色谱纯0.2mol/L乙酸铵溶液（H5.2）：称取酸铵15.4g至1L水中，调PH至5.2。氨水。高氯酸0.2%甲酸水溶液：取甲酸1mL，用水定容至500mL5%氨水甲醇溶液：取氨水5mL与95mL甲醇混合。苯乙醇胺A、沙丁胺醇、特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、西布特罗、喷布特罗对照品纯度≥95.0%。β-受体激动剂储备液的配制：分别精密称取9种β-受体激动剂，用甲醇配成浓度各约1mg/mL标准储备液，2℃-8℃冷藏保存，有效期1个月。混合对照工作液：分别吸取9种β-受体激动剂储备液，置于一棕色容量瓶中，用0.2%甲酸水溶液稀释成浓度为1μg/mL对照品工作液，2℃-8℃冷藏保存，有效期1个月。同位素内标：克伦特罗-D9、沙丁胺醇－D３、莱克多巴胺－D３、,苯乙醇胺Ａ－D３，纯度≥95.0%。同位素内标储备液：分别取四种同位素内标，用甲醇配成浓度约为10mg/mL。同位素内标工作液：分别取四种同位素内标储备液，用0.2%甲酸水溶液稀释成浓度为40μg/L 对照品工作液，2℃-8℃冷藏保存，有效期1个月。固相萃取小柱：混合型阳离子交换柱，3mL/60mg，或其他类似性能小柱。氮气：纯度99.9%。液相色谱-串联质谱仪（配有电喷雾电离源）。涡旋混合器。离心机：转速大于7000r/min。微量移液器： 100 μL。旋转蒸发仪。天平：感量0.0001g。滤膜：0.22μm，水系。提取取备用液（）5 mL于50 mL离心管中，添加内标工作液100μL ，充分混匀。加入40μLβ-葡萄糖醛酸-芳基硫酸酯酶，15mLH5.2醋酸铵缓冲溶液（.1.2），37.0℃震荡水浴16h后，加入0.5mL高氯酸，涡旋混匀，10000rmin离心5min。净化固相萃取小柱用3mL甲醇，3mL水，3mL2%甲酸水溶液活化，备用液（.1）过柱，3mL2%甲酸水溶液，3mL淋洗。空气抽干。5mL氨水甲醇溶液（.6）洗脱。收集洗脱液，40℃吹干后，1.0mL0.2%甲酸水溶液（.5）溶解，经0.22μm滤膜过滤后进样测定。测定液相色谱条件色谱柱：C18100mm×2.1mm，粒径1.7μm。或其他效果等同的C18柱柱温：40℃进样量：10μL流动相：A:甲醇；B：0.1%甲酸水溶液流速：0.3mL/min梯度洗脱：0～4.5min，5%A线性变化至70%，4.5～4.6min，70%A线性变化至100%A，4.6～7.5min维持100%A，7.5～7.6100%A线性变化至5%A，7.6～11.0min维持5%A。质谱条件离子源：电喷雾离子源监测方式：多反应监测扫描方式：正离子扫描电离电压：3.2KV源温：120℃雾化气温度：350℃锥孔气流速：50L/h雾化气流速：650 L/h药物定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量见表1药物定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量药 物 定性离子对（m/z） 定量离子对（m/z）