不同冻存液对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响.pdfVIP

第4卷 第5期 器官移植 Vo1．4 No．5 2013年9月 OrganTransplantation Sep．2013 · 实 验 研 究 · 不同冻存液对人脐带问充质干细胞 生物学特性 的影响 李田 李小毛 陈少宏 许成芳 张琪 【摘要】 目的 观察不同冻存液对人脐带间充质干细胞 (humanumbilicalcordmesenchymal stemcell，hUC．MSC)冻存复苏后生物学特性的影响，优化冻存方法。方法 脐带取 自2011年 1月至 2011年 12月在中山大学附属第三医院产科剖宫产的足月健康产妇。从脐带分离得到的hUC—MSC培养 传代，取第3代细胞。根据冻存液不同分为3组 ，A组冻存液为二甲基亚砜 (dimethylsuffoxide， DMSO)：胎牛血清 (fetalbovineserHm，FBS)：低糖杜 氏培养基 (1owglucoseDulbecco’SmodifiedEagle’S medium，LG—DMEM)为 1：2：7，B组为DMSO：FBS：LG—DMEM为 1：5：4，C组为 DMSO：FBS为 l：9， 不含 LG—DMEM。经冻存 12个月，复苏细胞，以第3代未冻存细胞悬液作为对照组 ，采用台盼蓝染色 法比较hUC—MSC的细胞存活率，采用噻唑蓝 (methylthiazolyltetrazolium，MTF)法比较细胞的生长情 况绘制生长曲线 ，倒置显微镜下观察细胞的生长状况，采用流式细胞仪检测各组细胞的表面标记。结 果 A、B、C三组的细胞存活率分别为 (20±4)％、(71±8)％和 (85±7)％。与c组比较，A组和 B组的细胞存活率降低，差异有统计学意义 (均为P0．05)。细胞生长曲线显示，与对照组相比， c组hUC—MSC在各时间点细胞生长迅速，但差异无统计学意义 (P0．05)；B组 hUC—MSC在24h、 48h、72h细胞生长差异无统计学意义 (P0．05)，在96h时间点生长速率低于对照组，差异有统 计学意义 (P0．05)；而A组 hUC—MSC在各个时间点细胞生长减慢，差异有统计学意义 (均为P 0．05)。形态学观察显示 ，A组细胞胞体宽大多角，并且较多分支，B组和C组细胞饱满，折光性好 ， 呈长梭形、纺锤形或多角形。A组细胞复苏后细胞数 目过少无法进行表面标记，B组和c组hUC—MSC 表面标记物 CD31、CD34、CD45、人类 白细胞抗原 (HLA) 一DR表达阴性，CD105、CD90、CIM4表 达阳性。结论 含高浓度血清的冻存液适合 hUC—MSC的长期保存 ，含90％FBS的冻存液为 hUC—MSC 的最佳冻存保护液。 【关键词】 问充质干细胞；脐带；冻存液；复苏 【中图分类号】R617 【文献标志码】A 【文章编号】1674—7445(2013)05—0006—06 Influence of different freezing mediums on biological characteristics of human umbilical cord mesenchymaistem cell L／Tian ，LIXiao—mac，CHEN Shao—hong，XU Cheng-fang，ZHANG Qi． DepartmentofGynecologyandObstetrics，theThirdAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，Guangzhou 510630，China Correspondingauthor：L1Tian，Email：sandylitian@21er~corn _ A【bstract】 0bjective Toinvestigatethedifferenceofbiologicalcharacteristicsofhumanumbilical cordmesenchym