达氟沙星单克隆抗体的制备与鉴定.pdfVIP

畜牧与兽医 2008年 第40卷 第 11期 达氟沙星单克隆抗体的制备与鉴定 龙 淼 ，杨正涛 ，张乃生h，朱连勤 (1．吉林大学畜牧兽医学院 ，吉林 长春 130062； 2．青岛农业大学，山东青岛 266109) 摘要：采用碳二亚胺法将达氟沙星与BSA和OVA偶联制成免疫抗原DFLXBSA、检测抗原DFLX．OVA。采用FeCI3显色反应、紫外扫描分析法 对合成的抗原进行了鉴定。用免疫抗原DFLX．BSA腹腔免疫BALB／c小鼠，有限稀释法筛选获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株 1株4F9，单抗 亚型鉴定为IgG1，并将此细胞株注射小鼠腹腔获得腹水，用辛酸一硫酸铵法对腹水进行了纯化。纯化后的抗体效价为2．48×10-。’，紫外分析方法 计算蛋白含量为 1．348mr,／mL。 关键词 ：达氟沙星；单克隆抗体；间接ELISA 中图分类号：$859．79 文献标识码：A 文章编号：0529．5130(2008)l1—0073．03 达氟沙星 (Danofloxacin，DFLX)也称单诺沙 达氟沙星的单克隆抗体，为以后免疫学检测方法的建 星，是继恩诺沙星之后研制的又一动物专用氟喹诺酮 立奠定了基础。 类药物，是美国辉瑞公司研制的第 3代动物专用氟喹 1 材料与仪器 诺酮类药物，于 1990年在墨西哥等 国家上市，我 国 于 1999年批准用于兽医l床。达氟沙星抗菌谱广， 1．1 材料 杀菌活性强，体内分布广泛，可多种途径给药，吸收 达氟沙星购 自中国兽药监察所；牛血清 白蛋 白 迅速，生物利用度高，在动物肺组织中药物浓度较 (BSA，MW：68000)、卵清 白蛋 白 (OVA，MW： 高，对呼吸道主要致病菌的抗菌效果好，是治疗畜禽 45000)，EDC (二环己基碳二亚胺)、NHS (N-羟基 呼吸系统感染性疾病的理想药物…。但其残留不容 琥珀酰亚胺)、PEG一1400 (聚已二醇)、DMF (二甲 忽视，张秀英 对达氟沙星药动学研究表明，达氟 基 甲酰胺)、HRP标记的羊抗 鼠二抗、邻苯二胺 沙星在鸡体内吸收迅速且完全，体内分布广泛，但消 (OPD)、胎牛血清均购 自Sigma公司；FCA，FIA， 除缓慢，有效浓度维持时间长。邓国东等 对达氟 RPMI一1640细胞培养基，HAT、HT培养基为 Gibco 沙星在鸡体内的组织残留表明，达氟沙星在鸡组织中 产品；小 鼠 Ig亚型测定试剂盒 (Isotripkit)购 自 消除相对较慢，制定鸡单次内服达氟沙星 (5mg／ BoehringerMannheim公司；羊血清为本实验室保存； kg)的休药期为3d。潘玉善 等提出鲫鱼皮肤作为 明胶购 自北京化工厂；96孔可拆酶标板购 自丹麦 达氟沙星在鲫体 内的残留靶组织。在 20℃时，皮肤 NCNC公司；其他试剂均为分析纯。 以100 g／kg为最高残留限量 (maximumresiduelim— 1．2 主要仪器 it，MRL)，并且建议休药期不低于23d。FAO／WHO 紫外分光光度计 (日本岛津uV．2501PC)、高速 食品添加剂联合专家委员会 (JCEFA)及欧盟制定了 离心机 (D-78532SPRVALLRC5CPLUS)、精密电子 达氟沙星在家禽可食性组织 中的最大残 留限量 天平 (LIBRORAEG．120)、721分光光度计、磁力搅 (MRLs)，肝、肾为0．4 g／g，肌 肉为 0．2 g／g，皮 拌器 (CJJ-781C型)、HI18314型PH计、冷冻干燥 肤／脂肪为0．1xIg／g，禁用于产蛋鸡 。 目前，对氟 机 (ALPHL．4)、酶标仪为美国Bio．TEK产品，型号 喹诺酮类药物的检测主要是高效液相色谱 (HPLC) 为EL