人肾透明细胞腺癌786-O细胞株的传代培养及其生物学特性初探.pdfVIP

· 18 · 实用临床医学 2008年第 9卷第 lO期 PracticalClinicalMedicine，29o81 1 1 人肾透明细胞腺癌 786一O细胞株 的 传代培养及其生物学特性初探 方正宇 ，傅平浪 ，马 明 ，孙 庭 (南昌大学 a．研究生院医学部 2005级 ；b．第一附属医院泌尿外科 ，南昌330006) 摘要：目的 探讨人肾透明细胞腺癌786一O细胞株体外培养的生长特性，为进一步的实验研究积累经验。方法 将 786一O细胞株于体外培养，进行传代、冻存、复苏和细胞计数等操作，并绘制细胞生长曲线。结果 786一O细胞株 在体外被成功培养，生长较快，每 3天传代 1次。细胞生长曲线呈 s形，分为潜伏期、对数生长期和停滞期，细胞倍 增时间大约 36h。结论 786一O细胞株能在体外稳定地传代培养。 关键词 ：肾细胞癌；786—0细胞；传代培养 中图分类号 ：R737．11 文献标识码 ：A 文章编号 ：1009--8194(2008)10--0018--02 2007年 7月一2008年 1月作者对人肾透明细 后 ，用含青、链霉素和 1O FBS的RPMI164O培养 胞腺癌 786—0细胞株进行了体外传代培养，将其研 基制成细胞悬液，以 1500r／min离心 8min，弃去 究结果叙述如下。 上清液。将离心过 的细胞与冻存液 (90 FBS+ 10 DMSO)混匀，分装、封 口，放入一80℃冰箱，隔 1 材料与方法 日后放人一196℃液氮罐保存 。 1．1 细胞株 1．3．3 复苏细胞 人肾透明细胞腺癌 786一O细胞株 ，购 自中国科 786一O细胞从液氮罐取出后 ，立即放人 38℃温 水 中解冻 ，并不停摇晃 ，避免水面淹没冻存管封 口 学院细胞库 。 处，解冻时间控制在 1min内。酒精擦洗冻存管后， 1．2 主要试剂 超净工作台内将细胞悬液移入刻度离心管内；以含 RPMI1640培养基购 自Gibco公司，胎 牛血清 青、链霉素和 109，6FBS的RPMI1640培养基 10倍 购 自杭州四季青生物工程材料有 限公司，胰酶购 自 稀释，稀释过程中注意将培养基逐滴加入并摇匀 ，使 南昌长城试剂公司 ，PBS粉末购 自北京 中杉公司， 细胞能适应渗透压变化。将稀释后的细胞悬液离 二 甲基亚砜购 自Sigma公司，青霉素购 自石药集团 心，参数为 1500r／min，离心8min；弃去上清液 ，以 中诺药业 (石家庄)有限公司(批号 、链霉 培养基将沉淀细胞打匀后移入培养瓶 中，加培养基 素购 自华北制药集团有限责任公司(批号 ：060422)。 至5mL，显微镜下观察细胞呈分散 、悬浮态 ，放回孵 1．3 实验方法 箱培养 。 1．3．1 传代培养 1．3．4 细胞计数 786一O细胞用含青、链霉素和 109，6FBS(胎牛血