产黄青霉克隆VHb基因后的工艺.pdfVIP

※ ※ ※ ※ ※ ※ ※ ※ ※ ※ ※ 岽 ※ ※ ※ 工 VoL3l Na3 工艺与设备 Mar． 2OD8 米 ※ ※ ※ ※ ※ ※ ※ ※ 崇 崇 ※ 崇 ※ 粜 产黄青霉克隆VHb基因后的工艺 赵梦清 ，白新荣 ，程振国z，李素荣 ，马文婵 ，鲍建芝 ，康 辉 (1．石药集团有限公司，河北 石家庄 050000；2．天津药业集团有限公司，天津 300161) [摘 要]对克隆了VHb基因的产黄青霉进行了传代稳定性研究，实验表明克隆VHb基因后的产黄青霉遗传稳定性可满足发 酵生产的要求，同时探索了最佳的摇瓶工艺条件，在新工艺条件下发酵产量可提高11％，通气量大幅下降。 [关键词]产黄青霉：传代稳定性；摇瓶工艺 · [中图分类号】Q 78 [文献标识码]B [文章编号】1003—5095(2008)03—0036-03 青霉素作为第一代抗生素，以其良好的抑制细胞 722型可见分光光度计，上海精密仪器仪表有限公 壁合成功能在医学上使用相当广泛，另外它又是制备 司；GY一50型摇床，上海离心机械研究所；Jw一12型蒸 中间体6一APA、7一ADcA的原料，使用量不断增大，各生 汽灭菌器，邢台医疗机械厂。 产厂家仍在扩大生产规模。 1．2试剂及材料 作为一个成熟的产业，生产竞争的焦点是成本和 菌种：PC—HBV一06，转化VHb基因后的青霉素生 质量。降低发酵成本的关键是提高发酵水平的同时降 产用菌种，下文中的样品组(原菌株PC-HB-08在以乙 低动力消耗。达到这个目的有两个关键点：一是改善 酰胺为惟一氮源的培养基上生长微弱，下文中的对照 发酵生产的设备条件以适应现有的生产菌种，二是改 组)。 良生产菌种自身以适应现在的生产条件同时提高生 试剂：有机试剂为生化试剂，无机试剂为分析纯 产水平。因为改善设备要投入较多的资金、周期长、技 试剂。 术风险大，加上市场价格的波动等因素，各生产厂家 2 方法 很少愿冒这样的风险，因此改良生产菌种是降低发酵 2．1 透明颤菌血红蛋白活性测试 生产成本的热门话题，选育高产低耗的菌种是当代青 接种PC-HBV-06原株和转化子30 mL于转化子 霉素技术进步的关键。 摇瓶培养基中，25℃，220 r／min培养28 h。过滤菌 青霉素发酵是耗氧发酵，空气成本占发酵成本的 丝体，无菌水洗2～3次，充分压干。取0．5 g加入等 1096左右，同时发酵设备的改良主要是围绕通气搅拌 量研磨粉，在液氮保护下研成细粉末，加入12 mL 开展的[1】。有文献报道将透明颤菌VHb基因成功地克 Q1 mol磷酸钾缓冲液(pH 。充分混匀，12 000 r／rain, 隆到了大肠杆菌、放线菌、曲霉中 ，降低了工程菌对 4℃离心10 min，取上清液，加入20 mg／mL的亚硫 氧的需要同时提高了生产水平[43。我们已经成功地将 酸钠，放置冰上，待亚硫酸钠完全溶解后平均分成两 VHb基因克隆到了青霉素的生产菌株——产黄青霉 份，一份敞口放置于空气中，另一份通cO，控制速度 中，这为筛选高产低通气量的工程菌成为可能。本文 每秒钟一个鼓泡，通30 min后用分光光度计测定 主要论述克隆后的稳定性验证、最佳生长条件的确定 420 nm的VHb-CO吸收差光谱。 等内容。