第二章微生物的纯培养和显微摄影技术.pptVIP

胡克的显微镜 詹森时代的复合式显微镜并没有真正显示出它的威力，它们的放大倍数低得可怜。荷兰人安东尼·冯·列文虎克（Anthony Von Leeuwenhoek ，1632-1723)制造的显微镜让人们大开眼界 列文虎克自幼学习磨制眼镜片的技术，热衷于制造显微镜。他制造的显微镜其实就是一片凸透镜，而不是复合式显微镜。不过，由于他的技艺精湛，磨制的单片显微镜的放大倍数将近300倍，超过了以往任何一种显微镜 列文虎克没有发明第一个复合式显微镜，他的成就是制造出了高质量的凸透镜镜头。 在接下来的两个世纪中，复合式显微镜得到了充分的完善，例如人们发明了能够消除色差（当不同波长的光线通过透镜的时候，它们折射的方向略有不同，这导致了成像质量的下降）和其他光学误差的透镜组 最经典的复式显微镜:Zeiss实验室显微镜这种显微镜与我们今天所使用的一些普通显微镜一模一样.事实上,我们现在所使用的一些普通型显微镜的结构都是以它为模板的，由于这种显微镜性能好,价格低廉(在中国都只卖400多元,而好的显微镜的价格都在几千到几万元),所以在一上市的时候就得到了人的青睐,很快占领了各大实验室和医院等地方.成为至今为止最畅销的复式显微镜,为科学的发展作出了巨大贡献. 与19世纪的显微镜相比，现在我们使用的普通光学显微镜基本上没有什么改进。原因很简单：光学显微镜已经达到了分辨率的极限。 人们花了很长时间才发现，光在通过显微镜的时候要发生衍射——简单的说，物体上的一个点在成像的时候不会是一个点，而是一个衍射光斑。如果两个衍射光斑靠得太近，你就没法把它们分辨开来。显微镜的放大倍数再高也无济于事了。对于使用可见光作为光源的显微镜，它的分辨率极限是0.18－0.2微米。任何小于0.2微米的结构都没法识别出来 色差是透镜成像的一个严重缺陷，发生在多色光为光源的情况下，单色光不产生色差。白光由红 橙 黄 绿 青 蓝 紫 七种组成，各种光的波长不同 ，所以在通过透镜时的折射率也不同，这样物方一个点，在象方则可能形成一个色斑 显微镜的重要光学技术参数 显微镜的光学技术参数包括：数值孔径、分辨率、放大率、焦深、视场宽度、覆盖差、工作距离等等。这些参数并不都是越高越好，它们之间是相互联系又相互制约的，在使用时，应根据镜检的目的和实际情况来协调参数间的关系，但应以保证分辨率为准 一． 数值孔径 （NA) (Numerical aperture) 数值孔径是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者（尤其对物镜而言）性能高低的重要标志。其数值的大小，分别标刻在物镜和聚光镜的外壳上 NA = n sin(u/2) n是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率 u是孔径角又称“镜口角,是物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成的角度孔径角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距离成反比 菌落———单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落 菌苔————但固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。 平板———熔化的固体培养基到入无菌平皿，冷却后，盛有固体培养基的平皿。 1、稀释倒平皿法 2、涂布平板法 3、平板划线分离法 4、稀释摇管法 返回 1、稀释倒平皿法 首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。 2、涂布平板法 首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落 。 3、平板划线分离法 最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落 1、利用选择培养基进行直接分离 ———通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术，称为选择培养分离。 2、富集培养 富集培养———创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物 ，从而使其在群落中的数量大大增加。 如果培养物中只有两种微生物，而且是有意识的保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。 是保存病毒的最有效