植物组织培养理论复习资料.pptVIP

绪论 植物组织培养：是在无菌条件下，利用人工培养基对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体等进行的培养。 培养基：根据植物营养原理和组织离体培养的要求而人工配制的营养基质。 外植体:由活体植物上切取下来进行培养的细胞、组织或器官。 植物细胞全能性：任何生活的植物细胞，只要有完整的膜系统与细胞核，就拥有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，并具备发育成完整植物体的潜在能力。 愈伤组织:指由外植体脱分化、分裂形成的多细胞团。（在人工培养基上从外植体上长出来的一团无序生长的薄壁细胞。) Haberlandt：提出单个细胞的植物细胞全能性理论。 “植物组培之父”。 Morel：染毒大丽花→脱毒植株，建立起了茎尖分生组织培养脱毒技术。兰花工业。 Murashige Skoog：在烟草培养中筛选出卓有成效的MS培养基。 White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁殖系。 第二章 实验室基本设备和技术 实验室组成： 准备室、接种室、培养室 实验室的维护： 定期消毒，及时维护 培养基的灭菌 （1）高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）p34： 适用于培养基、玻璃器皿及金属用具等的灭菌，要求在一定温度下保持适当的时间。 （2）过滤灭菌： 针对一些不能处于高温高压环境的物质。 常用需过滤除菌的物质： GA3、酶类、IAA、ZT、ABA、抗生素类和AgNO3 第三章 培养基 MS：1962年，Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的，广泛用于各种水平外植体的培养。 B5：1968，Gamborg等，大豆，双子叶植物纲十字花科植物 White：1943年由White为培养番茄根尖而设计。 无机盐含量较低，适于生根培养。 N6： 1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计 KM-8P：1974年为细胞和原生质体培养而设计的。 2、有机物 碳原：多用蔗糖（Sucrose），用量2～5％； 维生素：如：VB1、VB6、Vpp、Vc、VH、VB12、叶酸、肌醇等。 氨基酸：如：Gly、Ala、Glu、 Asn等； 天然复合物：如：CH（水解酪蛋白）、CM（椰子汁）、ME（麦芽浸提物）、YE（酵母浸提物）、TJ（番茄汁）、香蕉、马铃薯等。 植物激素：指一些在植物体内合成，对生长发育产生显著作用的微量有机物 生长素（auxin） 诱导细胞分裂，促进根分化；并与细胞分裂素互作可促进根、芽的分化和细胞增殖 ①常用种类：IAA、IBA、NAA、NOA、2,4-D等； 2,4-D：愈伤组织诱导与增殖，强烈抑制器官发生 细胞分裂素（cytokinin） 促进细胞分裂、促生芽、延缓组织衰老。 ①常用种类：KT、6-BA、ZT、TDZ（苯基噻二唑基脲）； 用 法：溶于0.5M 稀HCl或稀NaOH。 琼脂：多糖类物，96℃溶解，40℃凝固，用量0.7% -1.0%； 活性炭（AC）：吸附有害物质，防止褐变，便于根避光生长 AgNO3 ：防玻璃化苗、早衰、落叶；只能短期培养 抗生素：抑制内生菌污染；多数需过滤除菌 第四章 植物细胞全能性 细胞实现全能性能力分为三类 分生态细胞: 始终保持分裂能力，如茎尖、根尖分生区及形成层的细胞； 分化细胞: 在通常情况下不分裂，但受到外界刺激后可重新启动分裂，如表皮细胞及各种薄壁细胞。 终端分化细胞: 永久失去分裂能力，如筛管、导管、纤维、气孔保卫细胞等特化细胞； 愈伤组织的形成条件 离体 外源激素 愈伤组织的形成过程分为三个时期： 诱导期、分裂期和分化期 愈伤组织的形态类型 胚胎发生 多为单细胞起源 双极性 器官发生 多细胞起源 单极性 ★A. 器官分化的激素调控理论： i、器官分化（茎芽、根的分化）受到 CTK/AUX 激素比例关系的调控； ii、设CTK/AUX＝Ni，则可建立起茎、 芽、根分化情况与Ni的相关： Ni大 →芽的分化； Ni小 →细胞增殖与根的分化； Ni适中→保持愈伤组织生长状态； iii、不同物种、不同基因型对适中的Ni值要求 不同；起决定作用的是CTK/AUX的值，而非