三氧化二砷对肝癌HepG2细胞增殖的影响论文.docVIP

　　三氧化二砷对肝癌HepG2细胞增殖的影响论文 .freelol L-1 As2 O3 抑制程度明显强于1μmol L-1 .5和1μmol L-1 As2 O3 作用后细胞克隆形成率分别为（1.5±1.2）%和（12.3±2.2）%，明显低于对照组的（30.0±4.2）%（P 0.01）.As2 O3 对肝癌细胞有较强的细胞毒作用，且呈明显剂量和时间依赖性，其对肝癌细胞的杀伤率高于5-氟脲嘧啶（5-FU）和丝裂霉素（MMC）.freel;arsenicals/TU Abstract:AIM To explore the inhibitive effect of arsenic trioxide（As2 O3 ）on the proliferation of human liver cancer cell line-HepG2.METHODS The morphologic changes，proliferation ability，colony-forming rate of HepG2treated by As2 O3 icroscopy，groing assay.The cytotoxicity of As2 O3 on HepG2ined by MTT assay.RESULTS Colony-forming rate of HepG2ol L-1 As2 O3（1.5±1.2）%ol L-1 As2 O3 （12.3±2.2）%，P 0.01and much loark-able cytotoxic effect on HepG2and cytotoxic effect e dependent.The cytotoxic effect mol L-1 ，应用时用RPMI1640培养液稀释，4℃保存.肝癌细胞株HepG2由军事医学科学院分子病毒学研究所提供，RPMI1640培养液、小牛血清、台盼蓝、四甲基偶氮唑蓝（MMT）及二甲基亚砜（DMSO）均购于华美公司. 1.2 方法 1.2.1 As2 O3 对肝癌细胞生长曲线的影响 取对数生长期的肝癌细胞5×104 置于54个25mL的培养瓶中，待细胞贴壁后，实验组加入1μmol L-1 和5μmol L-1 的As2 O3 ，对照组加等体积的培养液，连续培养6d，每日各取3瓶，以台盼蓝拒染法计算活细胞数，取平均值，绘制生长曲线. 1.2.2 As2 O3 对肝癌细胞克隆形成的影响 取对数生长期肝癌细胞，采用有限稀释法，以每孔100个细胞接种于6孔培养板中，实验组分别加入1μmol L-1 和5μmol L-1 As2 O3 ，对照组加等体积的培养液，每个浓度设4个复孔，静止连续培养2ol L-1 As2 O3 ，对照孔加等体积的培养液，每个浓度设4个复孔，分别培养24，48和72h，每孔加入5g L-1 MTT10μL，再培养4h，弃去上清液，加入DMSO100μL，振荡15min，在酶联仪570nm处测吸光度A值.杀伤率按以下公式计算.杀伤率（%）=（对照孔A值-实验孔A值）/对照孔A值×100%. 1.2.4 As2 O3 与5-FU，MMC对肝癌细胞的细胞毒作用比较 采用MTT比色法，将对数生长期肝癌细胞1×10 4 接种于96孔培养板，待细胞贴壁后，实验组分别加入As2 O3 2μmol L-1 ，5-FU0.5g L-1 ，MMC4mg L-1 ，As2 O3 2μmol L-1 +5-FU0.5g L-1 ，As2 O3 2μmol L-1 +MMC4mg L-1 ，对照组加等体积培养液，按前述方法测吸光度A值，计算杀伤率. 2 结果 2.1 As2 O3 对肝癌细胞生长的影响 1μmol L-1 和5μmol L-1 均能明显抑制肝癌细胞的生长，随着药物浓度的增加，作用时间延长，抑制作用更明显，各浓度组和对照组之间活细胞数比较差异非常显著（P 0.01，Fig1）. 3 对肝癌细胞克隆形成的影响 1μmol L-1 和5μmol L-1 As2 O3 均能明显抑制肝癌细胞的 克隆形成，克隆形成率分别为（12.3±2.2）%和（1.5±1.2）%，5μmol L-1 组的抑制作用明显强于1μmol L-1 组（P 0.01），但两组与对照组（30.0±4.2）%比较差异均非常显著（P 0.01）. 2.3 As2 O3 对肝癌细胞的细胞毒作用 As2 O3 对肝癌细胞有较强的细胞毒作用，随着药物浓度的增加，作用时间的延长，杀伤率明显升高，各组间差异显著（Tab1）. 表1 As2 O3 对HepG2细胞的细胞毒作用（略） 3 与5┐FU，MMC对肝癌细胞的细胞毒作用比较