食源性疾实验室检测技术要点_培训课件.pptVIP

细菌性食物中毒样品检验程序 5.毒素测定 有些细菌性食物中毒并不是细菌本身所引起，而是由其所产生的毒素引起的，如金黄色葡萄球菌肠毒素、肉毒梭菌毒素，故须做其毒素的测定。 动物试验将可疑食物制备浸出液，或分离所得的上清液，皮下或腹腔注射动物(小白鼠 )体内，观察数日，看有无中毒 。 细菌性食物中毒样品检验程序 6.血清凝集试验 将中毒患者急性期和恢复期的血清，与自中毒检样中分离的致病菌所制成的菌体抗原(将分离菌接种培养基，37℃培养24小时，待其生长旺盛后，刮取菌苔至灭菌盐水中，混散均匀，用生理盐水稀释成6亿，毫升即成)做试管凝集试验，观察凝集价有无上升趋势，如恢复期的血清效价比发病初期有明显增高（增高4倍或以上）即有诊断价值。 经验 1.对所有样品进行致病菌分离和鉴定时应按照国家标准检验方法和已公认的微生物检验程序，应用直接分离及增菌双重培养，直接分离可检出样品中的优势菌(包括一些条件致病菌)．增菌可将样品中污染的但又菌量较少的病原菌捡出，同时对服药患者肛试样品中被抗菌素抑制的细菌达到复苏和增加菌量帕作用 2.由于多种病原菌引起的食物中毒，有相类似的临床症状，因此对致病菌的检测范围应扩大，在分离培养时应多准备一些各类菌的选择性培养基，采取多思路、多方法同时检测各种致病菌的原则，从而获得满意的检验结果。 经验 金黄色葡萄球菌 按GB4789—2010(以下简称GB)的方法有时不能检出。有一次食物中毒检验中我们同时用GB的方法和法国梅里埃公司生产的血浆凝固酶平板的方法，结果GB的方法没有检出，而血浆凝固酶平板的方法却检出了金黄色葡萄球菌，看来多种检验方法并用能提高致病菌的检出率。 2 副溶血性弧菌 食物中毒中最多见的一种致病菌。按GB方法样品经增菌后划TCBS平板，经18～24 h培养后菌落有时为不典型的黄色或黄绿色，继续培养24 h后菌落才成典型的蓝绿色，经生化鉴定符合副溶血性弧菌。这是因为溶藻性弧菌呈优势菌时，会影响副溶血性弧菌的菌落颜色。所以经24 h培养，菌落不典型时不要轻易放弃，应继续培养24 h后再作鉴定。我们在培养副溶血性弧菌时已多次出现这种情况。 经验 3 沙门菌 也是较常见的一种致病菌。 结果的报告、解释、分析 结果的报告、解释、分析 实验室检测结果是确定病因的重要依据，但实验室结果要和现场调查情况、患者的临床表现一起分析，才能确定病因。 检验结果的正确性不仅取决于实验室的条件和技术水平，同时还与检验样品的采集、保存、送样方法等方面有关。因此在分析检验结果时，除了应考虑结果是否符合有关实验室判定标准外，还应综合考虑各种困难影响检验结果的因素。 阳性结果不一定能说明病原因子在爆发事件中的致病作用；反之阴性结果也不一定能完全否定某种病原因子的病因假设 细菌性食物中毒的实验室诊断 要点： 从相关食品及发病者中分离到相同的致病菌 从同批发病者中分离到相同的致病菌 从食品中分离到致病菌的致病特点与发病者的临床症状相符 检出限值和检验结果的表达 每个实验室对已经建立的检测方法都要进行准确性和灵敏性评价，还要争取开展与其它检测方法之间进行比较的工作。每批样本都要对方法进行检出限值（最低检出浓度）测算，并将最低检出限值在发出的检测报告中注明。 对定量检测，如样本中毒物浓度超过检出限值，应标注出实际测出的数值；如在样本中检测出所检测的毒物，但毒物的量（或浓度）低于检出限值，应在检测报告中报告“检出”；对在样本中未发现目标毒物，应该检测报告上注明“未检出”。 对定性检测，样本中检出目标毒物时在检验报告上注明“阳性”；对未检出目标毒物者在检验报告上注明“阴性”。 结合流调资料分析检测结果 一致（合理） 不一致（合理） 检测阳性 假设成立 是否混杂？ 流调资料可信度？ 检测阴性 假设成立 是否假阴性？ 流调资料可信度？ 冲突结果的处理 每个重大中毒事件病因确定或中毒患者诊断的过程中都会有一次或多次毒物鉴定检测，各次检测结果应该有一致性，这些结果共同指向某一种（或多种）毒物。 冲突的原因分析 a. 检测方法、所用的仪器不同，其灵敏度、精确度不同，每种方法都有其局限性。一种方法能够检出的另外一种方法可能检不出。 b. 每个实验室采用的实验方法不同，包括样本前处理、实验条件等对结果也有影响。 c. 用于分析的样本是来自不同的个体、材料、位置及同一不均匀样本的不同部位，这些都带来不同的分析结果。 d. 样本采集、运输、实验室操作过程中的污染 分离不到病原性微生物可能的原因有 检测项目（如农药和病原体品种、厌氧菌） L型细菌 病原性微生物的数量很少，培养不出来 细菌处于非可培养的状态 现有的培养基和培养技术不适合这种微生物的生长 技术、设备、试剂的原因 新的病原微生物？未知毒物？ 流行病