艾滋病检测方法流行现状与实验室个人防护.ppt

艾滋病检测方法与应用 艾滋病检测的病毒学基础 艾滋病研究的历史 1981年美国报道首例病人 1982年提出获得性免疫缺陷综合征的定义（AIDS） 1983-1984分离出病毒（HIV） 1985研制出第1种HIV检测方法 1986发现HIV-2 1994发现HIV-1 O群 1995-1996年艾滋病研究的突破:联合抗病毒治疗, 对致病机理的新认识 HIV的形态与结构 HIV的主要结构基因和相应的抗原 HIV感染的血清学应答 HIV检测试剂发展的历程 多种HIV检测方法 ◆ 检测的目标: HIV抗体、HIV－1P24抗原,HIV RNA,HIV基因组 ◆ 检测的标本:血清/血浆，唾液、尿液 ◆ 检测的模式：ELISA、WB、IFA、快速法、核酸扩增等 ◆ 检测的用途：病原学诊断、监测病程和疗效、监测病毒变异 检测HIV抗体 是常规使用的诊断方法 方法学: ELISA试剂, 快速试剂(金标记, 硒标记), 家庭用试剂. 检测的标本:血清和血浆, 唾液, 尿液 ELISA试剂原理 间接法 双抗原夹心 固相抗原 固相抗原 待检样品 待检样品 酶标抗人Ig 酶标抗原 显 色 显 色 检测HIV抗体(ELISA法) 原理:间接法 (第1代,第2代试剂), 双抗原夹心法(第3代试剂). 判断结果有客观依据(临界值).可自动化操作. 可检测多种标本(血清,血浆,唾液,尿液) 是使用最广泛的方法 检测HIV抗体(快速法) 原理:间接法和双抗原夹心法 标记物:胶体金或胶体硒 优点:出结果快,操作简便,不需要复杂的实验室设备 适用于需要尽快得到结果的情况,如门诊,急诊,追踪意外暴露的传染源等等 快速法试剂原理 胶体金法 凝集法 胶体金标记抗人Ig 或抗原 检测线 固相抗原 质控线 固相人Ig 或抗HIV 抗体检测的特殊问题 窗口期: HIV感染后,尚未产生抗体. HIV(+), HIV抗体(-) HIV阳性母亲的婴儿:从母体被动获得HIV抗体,有可能HIV(-),HIV抗体(+) 用针对病毒本身的检测方法:P24抗原, HIV RNA, HIV DNA等 随访 检测HIV抗原(P24) 方法学:ELISA抗体夹心法 比抗体检出时间提前大约1周, 进一步缩短窗口期 用途:① 婴儿或窗口期HIV感染的诊断 ② 献血员筛选 ③ 监测疗效和病程进展 同时检测P24抗原和HIV抗体 第4代试剂 包被和标记的分别是P24抗原的单克隆抗体, HIV-1gp160,HIV-1 O gp41,HIV-2 gp36.分别用以检出P24抗原,HIV-1 M群,O群和HIV-2的抗体. 检出时间提前大约7天 HIV ELISA试剂的发展 HIV ELISA试剂的原理 缩短窗口期 先初筛, 后确认 初筛: 发现所有的阳性者, 不漏检.初筛试剂的敏感性必须好. 确认:剔除假阳性, 确定真正的阳性者.确认试剂必须具有高度的特异性. HIV抗体确认 目的是排除初筛的假阳性 有多种方法, 如免疫印迹法(WB), 免疫荧光法(IFA)和放射免疫沉淀法 检测的是不同HIV抗原的抗体 结论: HIV抗体阳性(Positive), HIV抗体阴性(Negative), HIV抗体不确定(Indeterminate) HIV抗体确认的标准 阳性: 二条env带或一条env带加一条p24带 阴性: 无任何条带 不确定: 有一个或几个条带但又不满足阳性标准 HIV抗体不确定(Indeterminate) 原因: ① HIV感染早期 ② 非特异反应, 与其他病原体的交叉反应 在正常人群中的发生率较高, 10-15% 处理方法: 随访3-6个月 和 检测HIV的其他指标,如P24, HIV RNA等 病毒载量测定的方法学 逆转录多聚酶链反应(RT-PCR) 分支DNA信号放大系统(bDNA):带有侧链的分支DNA片段起信号放大作用 核酸序列扩增系统(NASBA):等温RNA扩增系统 病毒载量测定的意义 预测疾病的进程: 高病毒载量预示病程快速发展 监测疗效: 有效的抗病毒治疗应该能够显著降低病毒载量 早期诊断: 检测HIV RNA可以使窗口期缩短至大约1周 HIV病毒载量有生物学