牛精子蛋白质组学技术平台的建立及冻融前后精子差异蛋白初步分析.pdfVIP

中国生物工程杂志 China Biotechnology , 2008 , 28 (7) :37 - 42 牛精子蛋白质组学技术平台的建立及冻融前后 精子差异蛋白初步分析* 陈龙1 ， 2 川朱化都l 川沙里金4 韩伟东1 ， 2 王栋l 树 王宗礼3 郝海生1 杜卫华l 程金华1 (1 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京 附阴4 2 甘肃农业大学动物科学技术学院兰州 73朋70) (3 农业部畜牧业司北京附则26 4 北京奶牛中心北京 1 侃)()85) 摘要 通过探索不同的精于蛋白制备方法、水化液成分和优化2D 电泳程序以建立牛精于蛋白质 纽学研究技术平台，同时以牛鲜冻精为实睡材料通过益异凝肢电泳寻找凉融前后椅子蛋白的改 变。结果表明:使用改进的热 TRlzol 法裂解精于细胞制备蛋白，结合优化的 2D 电泳技术可建立 稳定的牛精子蛋白质组学研究技术乎命。 差异凝脱也泳揭示牛精子在冻融后有质和量的改变: 冻融后缺失的蛋白点有20 个，表达下调的有2 个，表达上调的有 10 个。作为一项阶段性的实晗 成果，研究建立的 2D 平台和所发现的冻融引起的差异表达蛋白质点为揭示冷峰损伤机理和性投 精液的差异蛋白质组学研究奠定了较好的基础。 关键词精于 TRlzol 差异，蛋白 中团分提号 TQ93 哺乳动物精于是经过一系列复杂生精过程而形成 1:闹了解精子蛋白质组成有助于研究正常精子形成的 分子机理，间时，运用双向电泳及其相关技术研究蹄融 的高度特化的细胞。作为传递生命遗传信息的载体， 精子细胞核岗皮撒缩形成流钱型的头部，细胞质浓缩 前后精子蛋白结构和功能的改变，有助于从蛋白质组 整体角度揭示精子冷冻损伤的分子机制。 井转化为顶体、尾等，这些特殊的结构特点使得从 ONA 本研究从细胞功能的执行者蛋白质人手，适用蛋 和 RNA 水平对其研究存在一定的局限性[IJ 。而蛋白 白质组学理论和方法建立牛精子麓白质细学研究技术 质作为椅子细胞发挥功能的结构基础，日成为学术界 平台，同时以牛鲜冻精为实验材料寻找差异表达蛋白， 研究的鹅点。近年来，精子蛋白质组学在男性生殖医 旨在通过揭示冷冻保存所导致的蛋白质组结构和功能 学领域中广泛运用，并取得了一定的成果[2410 但是， 改变的实质，充分阐明冷冻损伤的机理，为家畜精掖玲 在动物繁殖领域鲜有此类研究报道。另外，影响冷冻 礁保存提供理论依据，从而促进精液冷冻保存技术的 精撒在医学及畜牧学领域广泛应用的一大瓶颈是冻存 快速发展。 后的椅子从结构到功能都受到一定的损伤，表现为精 子运动持续时间减少，受精率降低等[5] 。为了提高冻 1 材料与方法 精洁率和受精率，科研工作者从冷冻稀挥撒成分和冷 1.1 材料 冻方法等方闹做了大量工作，但是进展并不明显，这主 1. 1. 1 精液样本 九头牛鲜陈精液均购自北京奶牛 要是四为对精子冷冻损伤的确切机理尚不十分清楚。 中心。 收稿日朔:2∞8-01-14 修l~l 日期:2∞