制片、染色及显.pptVIP

* 步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上 * 步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层 * 步骤4：风干 * 步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定 * 步骤6：结晶紫染色1分钟 * 步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片 * 步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗 * 步骤9：酒精脱色至下滴液为无色，立即用蒸馏水冲洗 * 步骤10：番红复染1分钟，用蒸馏水轻轻冲洗 * 大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图 革兰氏染色阴性杆菌（红色） * 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）革兰氏染色 革兰氏染色阳性球菌（紫色） * 注意事项 1．革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。 2 ．选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 3.干净的玻片、热固定、每一步水洗要彻底并且吸干等也是实验成功的关键。 * * 鞭毛 化学组成： 鞭毛蛋白 功能： 运动器官 与致病有关 鉴定分类细菌 * 荚膜 化学组成： 多糖或多肽 功能： 抗吞噬作用 粘附作用 抗有害物质损伤作用 * 芽孢 脱水而成，为细菌休眠形式 功能与医学上意义： 对外界的抵抗力增加 可发芽成繁殖体有致病性 有鉴别作用 应以杀死芽胞为灭菌效果的指标 * 菌毛 化学组成： 菌毛蛋白 种类与功能： 普通菌毛—与致病有关 性菌毛—与遗传变异有关 * * 食品微生物检验规范操作基础培训5 制片、染色及显微观察福建出入境检验检疫局技术中心食品所微生物实验室2010.05 * 主要内容： § 1　清洗、消毒和灭菌操作 § 2　培养基的制备 § 3　采样和取、制样 § 4　接种、分离纯化 § 5　制片、染色及显微观察 § 6　实验室安全基础知识　 * 5.1　显微操作 显微镜是微生物检验中最常用的精密光学仪器。 显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。 食品微生物检验中最常用的是普通光学显微镜。 * * 显微镜的使用方法 用光学显微镜观察微生物形态时，一般遵循先低倍镜观察，后高倍镜观察，再油镜观察 。 　　 * 低倍镜操作方法 1.两眼从侧面注视 低倍物镜对准通光孔，使用粗调焦螺旋将镜筒自上而下的调节，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破玻片。当物镜镜头与载物台的玻片相距2～3mm时停止； 2.左眼注视 （注意右眼应该同时睁着），并转动粗调焦螺旋，使镜筒徐徐上升，直到看清物象为止； 3. 再用微调焦螺旋调至清晰。 注意：粗调调焦螺旋只用于上调载物台，如观察显微镜时，用粗调节器调节，有压碎载玻片、损坏物镜的危险。因此，用细调焦螺旋调节视野使其更清晰 * 高倍镜操作方法 1.将低倍镜观察到的目标移动至视野中央； 2.将低倍镜镜头转换成高倍镜镜头。换用高倍镜后，视野内亮度变暗，因此一般选用较大的光圈并使用反光镜的凹面； 3.用微调焦螺旋调至清晰。观看的物体数目变少，但是体积变大。 注意：高倍镜观察时，光线需增强。 * 油镜操作方法 1.将高倍镜观察到的目标移动至视野中央； 2.将高倍镜镜头挪开，于载玻片上滴一滴香柏油； 3.将油镜镜头移动至视野，让油镜镜头浸入香柏油（至油晕不再扩大为止）； 4.用微调焦螺旋调至清晰。 注意：油镜的操作需要较强的关线，故需将光线调至最强。 用10倍和/或40倍物镜为随后的高倍油镜（90倍或100倍）选择合适的视野（油镜镜筒上通常刻有H.I.OIL或OEL等标志） * 油镜用后的处理： 第一遍：用擦镜纸拭去镜头上的油； 第二遍：用擦镜纸蘸少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去头上残留的油迹； 第三遍：再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。 * 普通显微镜的保养 (1)观察完后，移去观察的载玻片标本。 (2)用过油镜的，应先用擦镜纸将镜头上的油擦去，再用擦镜纸蘸着二甲苯擦拭2—3次，最后再用擦镜纸将二甲苯擦去。 (3)转动物镜转换器，放在低倍镜的位置。 (4)将镜身下降到最低位置，调节好镜台上标本移动器的位置，罩上防尘套。 镜头清洁，只能用软而没有短绒毛的擦镜纸 ，物镜的清洗，可选用不同的溶剂，如酒精、丙酮和二甲苯等，其中最安全的是二甲苯。 * §5.2 制片和染色 染色原理 由于微生物细胞含有大量水分，机体是无色透明的，与周围背景没有明显