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光学显微镜基

清洁工具 * * 清洁液配方:1份无水乙醇+3份乙醚 * 擦拭方法 * 注意 塑料表面勿用乙醇乙醚混合液擦洗。 严禁用干擦镜纸擦拭镜头。 物镜严禁拆卸并防止振动。 打开电源前应 * 思考题 在使用高倍镜时,如果把标本片放反了,将会出观什么问题?为什么? 在低倍镜调节焦距时。当视野中出现了能随标本片移动而移动的颗粒或斑纹。是否只要调节推进器将标本对准物镜中央,就一定能观察到标本的物像?为什么? 高倍镜呢? 你如何分析判断视野中所见到的污物点是在目镜上? 使用显微镜观察标本.为什么—定要从低倍镜到高倍镜再到油镜的顺序进行? 在低倍镜下已看到物像。在转换高倍镜时却直接转换不过来,试分析可能有哪些原因? * * 荷兰眼镜制造商J.Janssen和Z.Janssen父子制作了第一台复式显微镜,尽管其放大倍数不超过10倍,但具有划时代的意义 * 1665 英国人Robert Hook用自己设计与制造的显微镜(放大倍数为40-140倍)观察了软木(栎树皮)的薄片,第一次描述了植物细胞的构造,并首次用拉丁文cella(小室)这个词来称呼他所看到的类似蜂巢的极小的封闭状小室(实际上只是观察到到纤维质的细胞壁)。 * 1680荷兰人A. van Leeuwenhoek成为皇家学会会员,一生中制作了200多台显微镜和500多个镜头。他是第一个看到活细胞的人,观察过原生动物、人类精子、鲑鱼的红细胞、牙垢中的细菌等等。 * 焦深指保持于焦点区的最大深度,焦深随物镜倍率增加而减小,深(Depth of focus)即物镜成象的焦点深度。一般物镜成象时并不仅仅只成一个平面,而是上下一定范围内都能看清楚。越是高倍的物镜焦深越短。对于显微摄影,如果需要焦深较大的效果,则可以选择同倍率下N.A.较小的物镜或使用带光阑的物镜,减小NA值。 物镜数值孔径 * 3.5放大率 在显微镜下所看到的物像和实际物体之间的大小比例叫显微镜的放大率或放大倍数。显微镜下物像的放大主要由物镜、镜筒长度、目镜所决定。适合的放大倍数决定于物镜的数值孔径,一船应为数值孔径的500――1000倍。 3.6像差 * 像差 球差 象散 慧差 场曲 负畸变 正畸变 * 色差 * 球差校正 * 色差校正 * 3.7焦点深度 在显微镜的光轴上有一段距离范围内物体被看得清晰。超出这段距离的物体就模糊不清。这段距离位于显微镜焦点的上下很小的范围之内。这段距离的上下限叫焦点深度。 * 焦点深度 * 3.8视场数 目镜中观察到的物像的一定范围叫视野。 显微镜的总放大率小的时候所能看到的标本的范围大,而总放大率愈大所能看到的标本的局部愈小。所以说视野与显微镜的总放大率成反比。 在同一总放大率的条件下视野也可有大小差别。这种差别决定于目镜的某些性能。首先目镜的视场光栏的直径是最主要的条件。视场光栏的直径叫目镜的视场数值. * 3.9工作距离 工作距离也叫物距,即指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离。 在物镜数值孔径一定的情况下,工作距离短孔径角则大。 数值孔径大的高倍物镜,其工作距离小。 * 点光源经过光学仪器的小圆孔后,由于衍射的影响,所成的像不是一个点,而是一个明暗相间的衍射图样,中央为爱里斑。 s1 s2 D * * 爱里斑 * 瑞利判据:当一个点光源的衍射图样的中央最亮处刚好与另一个点光源的衍射图样的第一级暗纹相重合时,这两个点光源恰好能被分辨。 恰 能 分 辨 能 分 辨 不 能 分 辨 * 提高显微镜分辨率的方法: (1)增大物镜的数值孔径 在物镜和盖玻片之间充以n 较大的油,如香柏油n =1.52,不仅使n 增大,而且孔径角? 也增大。 (2)用短波长的光照射 如紫外光显微镜,电子显微镜。 * 4 显微镜的结构 组成 光学放大系统 照明系统 机械和支架系统 物镜 光源 折光镜 聚光镜 滤光片 目镜 * 光学显微镜基本结构: 1. 照明灯(Lamp) 2. 聚光器(Condenser) 3. 载物台和切片夹(Mechanical stage and specimen retainer) 4. 推进器(Mechanical stage adjustment knob) 5. 物镜(Objectives) 6. 粗细螺旋(Course and fine focus knob) 7. 目镜(Oculars) 8. 照相机等接口(Connection to camera, etc.) * * 4.1物镜 物镜(objective)是光学显微镜成像系统中决定其分辨率或叫分辨本领的最关键部件。 (1)消色差物镜(achromat) 色差校正使可见光中红光和蓝光聚焦于一点,而

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