副结核分枝杆菌 MAP0862、MAP1345基因的串联表达及其在间接 ELISA 中的初步应用.pdfVIP

·１６ · 中国兽药杂志 ２０１６，５０（６）：１６ ～２１／张 振，等　 副结核分枝杆菌 ＭＡＰ０８６２、ＭＡＰ１３４５ 基因的串联 表达及其在间接 ＥＬＩＳＡ 中的初步应用 １，２ ２ ２ ２ １，２ １ ２ * ２ * 张 振 ，张 阁 ，彭 永 ，彭小薇 ，孙翠丽 ，常维山 ，朱良全 ，丁家波 （１．山东农业大学动物科技学院，山东泰安２７００１８；２．中国兽医药品监察所，北京１０００８１） ［收稿日期］２０１６ －０４ －２６　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００２ －１２８０ （２０１６）０６ －００１６ －０６　［中图分类号］Ｓ８５２．５ ［摘　要］　为探索副结核特异性蛋白ＭＡＰ０８６２ 与ＭＡＰ１３４５ 在牛副结核病血清学诊断中的作用， 将通过串联表达获得的融合蛋白ＭＡＰ０８６２ －１３４５ 纯化定量后包被酶标板，经过对反应条件的优化， 初步建立了基于融合蛋白ＭＡＰ０８６２ －１３４５ 的间接ＥＬＩＳＡ 诊断方法。使用建立的ＥＬＩＳＡ 方法对牛 副结核病阳性血清、牛结核病阳性血清、牛布病阳性血清、卡介苗免疫牛血清、健康牛血清检测的结 果表明其具有较好的特异性；使用该方法与ＩＤＥＸＸ 副结核病抗体检测试剂盒共同对３００ 份临床血 清样本检测，总符合率为９２．７％。 ［关键词］　副结核分枝杆菌；串联表达；间接ＥＬＩＳＡ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ ｓｕｂｓｐ.ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ＭＡＰ０８６２，ＭＡＰ１３４５ ａｎｄ Ｐｒｉｍａｒｙ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ １，２ ２ ２ ２ １，２ ＺＨＡＮＧＺｈｅｎ ，ＺＨＡＮＧ Ｇｅ ，ＰＥＮＧＹｏｎｇ ，ＰＥＮＧＸｉａｏ－ｗｅｉ ，ＳＵＮ Ｃｕｉ－ｌｉ ， １ ２ * ２ * ＣＨＡＮＧＷｅｉ－ｓｈａｎ ，ＺＨＵ Ｌｉａｎｇ－ｑｕａｎ ，ＤＩＮＧＪｉａ－ｂｏ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉａｎ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ２７００１８，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｃｈｉｎａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＤｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｏｆＭＡＰ０８６２ ａｎｄ ＭＡＰ１３４５ ｉｎｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＢｏｖｉｎｅｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｂｙ ｔａｎｄｅｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｃｏａｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｔｅｒ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｗａｓ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ａｆｔｅｒ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ＭＡＰ ａｎｔｉｓｅｒａ，Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｎｔｉｓｅｒａ，Ｂｏｖｉｎｅ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（ＴＢ）ａｎｔｉｓｅｒａ，ＢＣＧ ａｎｔｉｓｅｒａ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｒａ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ３００ ｓｅｒａ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆＭＡＰ０８６２ －１３４５ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｗｉｔｈ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｋｉｔ ｗａｓ９２．７％． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｍｙｃｏｂ