急性有机磷中毒动物机能指标的动态观察与测定.pptVIP

急性有机磷中毒动物机能指标的动态观察与测定 指导老师：林明栋 余剑平 组员：陈春宇 陈达标 黄利军 李庆志 一 课题背景知识回顾 近年来，急性有机磷农药中毒（AOPP）患者逐年增多，对AOPP的防治成了国内外研究的一个热点课题。 有机磷酸酯类进入机体后，与血浆胆碱酯酶（AChE）生成难以水解的磷酰化胆碱酯酶，使 AChE 失去水解ACh的能力，导致不同程度的中毒表现。 一 课题背景知识回顾 有机磷中毒时对AChE的抑制作用已阐明，但中毒过程中逐步出现的M样，M N样和中枢神经系统（CNS）的轻、中、重度中毒表现。通常只是以测定的AChE值为判定AOPP的中毒程度及指导抢救用药的常规方法。目前临床上的传统抢救方法是抗胆碱药阿托品和胆碱酯酶复能剂氯磷定配伍。 一 课题背景知识回顾 临床上在急性有机磷中毒抢救方面工作都比较单一地依赖于血浆ChE值作为诊断依据，且在抢救过程中对该项指标进行动态监测也鲜见报道。 探索急性有机磷中毒及给予药物解救后多个指标的动态变化进行监测记录，能够帮助我们进一步了解中毒及解救药物作用机理，指导临床治疗。 二 探索性研究成果阶段性汇报 （一）实验方案 ① 材料及方法 （一）试剂 0.1%硫酸阿托品、5%敌百虫、1%肝素、2.5%解磷定、75%酒精、胆碱酯酶试剂盒（南京建成生物研究所）、血糖试纸 ① 材料及方法 （二）仪器 血糖仪（Sure Step）、恒温水浴、分光光度计、离心机、微量移液管（50-200μL、200-1000μL）、试管架、一次性小试管若干（10ml）、兔固定箱、注射器（5ml、10ml）、量筒（100ml）、烧杯（150ml）、玻璃棒、保温瓶、试剂瓶、测瞳尺（可用游标卡尺代替）、刀片、棉球 ① 材料及方法 （三）实验动物及分组 实验动物：家兔，体重2~2.5kg 动物分组：分阿托品急救组和解磷定急救 组，每组4个动物 ① 材料及方法 （四）动物模型建立 预实验： a. 取家兔2只，编号，称重。观察呼吸等各项指标； b. 将其中一个兔固定于兔箱内，以醮有酒精的棉球擦拭兔耳缘静脉，使血管扩张，充血明显时，用刀片横断耳缘静脉，取一小滴滴到血糖试纸上测定正常情况下血糖，然后让血液自然滴入试管（管中预先滴入2滴肝素，自然干燥后备用）中，供测正常胆碱酯酶活性用（测定胆碱酯酶活性备用血取出来后马上放进冰水中冷冻，保持酶活性，待整个实验全部血样取完后统一测定酶活性）。 c. 按照2.0ml/kg的标准从耳缘静脉处注射5%敌百虫，观察记录表所示各项指标，中毒症状明显时按照b步骤中的方法取血测定血糖和备血测定胆碱酯酶； d. 出现重度中毒现象时，立即给家兔注射0.1%硫酸阿托品1ml/kg、当症状出现明显缓解时取血测定血糖、备血测定胆碱酯酶活性； e. 换用另外一只家兔，按照同样的方法步骤（d步骤注射2.5%解磷定）进行预实验。 f. 测定胆碱酯酶活性（步骤参考试剂盒使用说明书）； 通过预实验过程主要摸索清楚出现中毒的大概时间、中毒的症状，以便适当地确定取血测定点，并熟悉操作； g. 按照前面的步骤和预实验摸索出来的取血点，分成阿托品急救组和解磷定急救组（每组4个家兔，雌雄各半）进行正式实验。 （二）实验结果 中毒及解救体征变化趋势 给敌百虫后 家兔呼吸变得急促，瞳孔变小，唾液分泌增多，排便增多。几分钟后，家兔四肢开始瘫软，行动不便并出现肌颤。随着中毒时间延长，以上观察指标变化更为明显。瞳孔继续变小，并有发散现象；唾液大量增多，部分家兔泪腺分泌增多；排便频繁且逐渐呈稀糊状；呼吸更为急促，部分家兔可闻及湿罗音。肌颤明显加剧，四肢瘫软。其精神状况逐渐变差，目光涣散，最后意识模糊，甚至完全丧失。 阿托品解救 瞳孔迅速变大；唾液和泪腺分泌较前明显减少，排便减少，呈稀糊状；以上指标逐渐恢复到正常水平。其呼吸急促，可闻及明显湿罗音。肌颤较前减缓，但没有消失，四肢仍然完全瘫软无力，不能站立；精神状况逐渐恢复，意识清醒。 解磷定解救 呼吸较前平缓，未闻及湿罗音；唾液和泪腺分泌减少，排便减少；以上指标逐渐恢复到正常水平。其瞳孔大小基本不变，但发散现象消失；精神状况有所改善，但总体情况比第一组的差。注射足量解磷定后，肌颤马上消失，部分家兔后期再次出现轻微肌颤。其行动能力有所恢复 CHE活力变化 SPSS结果 血糖变化 SPSS结果 结果分析 症状部分 急性有机磷中毒症状复杂多样，轻度者以M样症状为主，中度者可同时出现M样和N样症状。严重者除M样和N样症状外，还有显著的CNS症状。模型的建立是给大剂量的敌百虫使得家兔经历由M到CNS样症状的变化然后解救。 M样症状 M受体存在于大多数