李轶群-生技2班2组.docVIP

读书笔记-萌发小麦淀粉酶酶学性质的研究 参考文献:王柱亭,?张书阁.?淀粉酶简易快速纸片测定法[J].?河北医药,?1984,(05) 实验材料:小麦（Triticum?aestivum）（由东北农业大学生命科学学院生化教研室提供) 试验方法 2.1麦芽糖标准曲线的制作 取6支干净的具塞刻度试管，分别编号1、2、3、4、5、6。依次分别加入麦芽糖标准液0?mL、0.2?mL、0.6?mL、1.0?mL、1.4?mL、1.8mL，蒸馏水2.0?mL、1.8?mL、1.4?mL、1.0mL、0.6?mL、0.2?mL，3,5-二硝基水杨酸各2.0mL。（麦芽糖含量依次为0mg、0.2?mg、0.6mg、1.0?mg、1.4?mg、1.8?mg）药品加好后摇匀，置于水浴中煮沸5min，取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20mL，以1号管作空白调零点在540nm波长下比色测定光密度，以麦芽糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。 2.2淀粉酶粗酶液的提取 称取1g萌发的小麦种子置于研钵中，加入少量石英砂和2mL蒸馏水研磨匀浆，将匀浆倒入刻度试管中定容至25mL，提取液在室温下静置提取15~20min每隔数分钟搅动一次，使其充分提取，然后在4000rp/min转速下离心10min，将上清液倒入一个干净试管中，即为淀粉酶粗酶液. 2.3温度对淀粉酶的活性的影响 准备8支试管分别编号A、a、B、b、C、c、D、d。在A、B、C、D中分别加入pH=5.6的缓冲液1mL,然后分别加入2.5mL淀粉溶液。在a、b、c、d中分别加淀粉酶提取液1mL。将A、a放在4℃的环境下预保温10min；将B、b放在室温的环境下预保温10min；将C、c放在40℃的环境下预保温10min；将D、d放在沸水浴的环境下预保温10min。然后将A倒入到a中，将B倒入到b中，将C倒入到c中，将D倒入到d中。将a、b、c、d分别放在4℃、室温、40℃、沸水浴10min。最后在各试管中加入碘液各三滴，并记录观察到的颜色。 2.4pH对淀粉酶的活性的影响 准备三支试管分别编号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，在试管Ⅰ中加入PH为3.0的缓冲液2ml。同理在试管Ⅱ中加入pH为5.6、试管Ⅲ中PH为8.0的缓冲液2mL。然后再各加入淀粉溶液2.5mL，淀粉酶提取液1mL。摇匀,40℃水浴10min。最后各加碘液3滴，将并记录观察到的颜色。 2.5激活剂与抑制剂对淀粉酶的活性的影响 准备三支试管分别编号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，首先各加缓冲液（pH5.6）2mL。然后在Ⅰ中加NaCl溶液1mL,Ⅱ中加CuSO4溶液1mL,Ⅲ中加水1mL。在三个试管中各加2.5mL淀粉溶液及1mL淀粉提取液，摇匀,40℃水浴10min。最后各加碘液3滴，并记录观察到的颜色。 2.6α-淀粉酶活力的测定? 分别称取2g萌发的小麦种子根、芽、麦粒，置于研钵中，加入少量石英砂和2ml蒸馏水研磨匀浆，将匀浆倒入离心管，提取液在室温下静置提取15~20min每隔数分钟搅动一次，使其充分提取，然后在4000rp/min转速下离心10min，将上清液倒入25mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度摇匀，即为淀粉酶原液。（用于α-淀粉酶活力的测定）? 准备4支干净的试管。分别编号为0、1、2、3。分别向1、2、3、号管中加入淀粉酶原液1mL，然后将各试管和淀粉溶液置于70℃水浴中15min，取出后冷却，再将各试管和淀粉溶液置于40℃水浴中保温10min，然后分别在1、2、3号管中加入pH=5.6的柠檬酸铵缓冲液1mL，向1管中加入氢氧化钠4mL,分别向1、2、3号管中加入淀粉溶液2.0mL，0号管内加入蒸馏水2mL作为空白组，在40℃水浴中进行准确保温5min;最后在2、3号管中加入氢氧化钠各4mL(终止酶促反应)。? 将各试管摇匀，分别取1mL,放入25mL刻度试管中，再加入2mLDNS试剂混匀，置于沸水浴中煮沸5min,取出冷却，用蒸馏水稀释至25mL混匀，在分光光度计为540nm处进行比色，测定光密度值，记录测定结果。? 按照以上步骤分别测定小麦芽和跟试验过后的光密度值，记录测定结果。 2.7淀粉酶总活力的测定 分别称取2g萌发的小麦种子根、芽、种子，置于研钵中，加入少量石英砂和2mL蒸馏水研磨匀浆，将匀浆倒入离心管，提取液在室温下静置提取15~20min每隔数分钟搅动一次，使其充分提取，然后在4000rp/min转速下离心10min，将上清液倒入25mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度摇匀，即为淀粉酶原液。（用于α-淀粉酶活力的测定）吸取上述淀粉酶原液1mL，放入2mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶稀释液。（用于淀粉酶总活力的测定）? 准备4支干净的试管。分别编号为0、1、2、3。分别向1、2、3、号管中加入淀