烟草维生素B6代谢.docVIP

分类号： 单位代码： 10364 密 级： 学 号： s08083201272 安徽农业大学 学位论文 烟草体内维生素B6的代谢研究 Metabolic Research of Vitamin B6 in Tobacco Plant 研 究 生: 曾海彬 指导教师： 黄龙全 教授 合作指导教师： 申请学位门类级别： 农学 专业名称： 食品科学 研究方向： 食品科学 所在学院： 茶与食品科技学院 答 辩 委 员 会 主 席： 二零一一年 五 月 摘要 维生素B6（VB6）是一类化合物的总称。近年来研究发现VB6在植物体内发挥抗逆作用。烟草作为模式植物其体内VB6的存在形态还未见报道。本研究采用高效液相色谱荧光检测技术对烟草体内VB6的存在形态进行了分析。结果表示：土壤栽培烟草叶、茎和根中VB6的含量依次为2.9、1.7、3.0 μg/g鲜重；组培烟草叶片的VB6含量为3.9 μg/g鲜重，构成比为磷酸吡哆胺（PMP）7%、吡哆胺（PM）14%、磷酸吡哆醛（PLP）19%、吡哆醛吡哆醇MS培养基上外源添加VB6（PM，PL，PN）VB6的存在形态和取烟草叶片组织加液氮研磨，提取液得到粗酶液，测定相关代谢酶的酶活，分析VB6相关代谢酶酶活变化为应答分析提供实验依据。外源添加PM后叶片中PM显著增加。外源添加PL后叶片组织中PL的量有所增加，PN增加更为显著。外源添加PN后叶片中PN的量显著增加。以上三种不同处理并未引起PMP、PLPVB6的总量都显著变化。 为了分析植物吸收VB6的方式，通过在MS培养基中设置不同的梯度，分析添加量和吸收量直接的关系，发现烟草吸收VB6的方式为自由扩散。 植物吸收VB6以后，在体内进行了相应的代谢，本实验通过摸索与VB6代谢相关代谢酶的酶反应最适条件，发现PL激酶最适ph 5.5 反应时间3h，PNP/PMP氧化酶最适pH 9.0反应时间2h，PLP-磷酸酶最适pH 5.5 反应时间10min，PL还原酶最适pH 7.0 反应时间2h，PM-丙酮酸转氨酶最适pH 11，反应时间2小时。反应温度都为37℃在上述最适的酶反应条件下测得各酶的酶活分别为PL激酶 0.03 ± 0.01nmol/min/g鲜重0.12 ± 0.01 nmol/min/g鲜重179.71 ± 41.46 nmol/min/g鲜重0.78 ± 0.04 nmol/min/g鲜重2.14 ±0.15 nmol/min/g鲜重Vitamin B6 (VB6) is the general term for a kind of chemical compounds .VB6 exists in several forms, and has been linked to stress responses in plants. Until now no reports about the distribution of B6 vitamers in tobacco plants have been observed. In our experiment, the determination of VB6 vitamers in tobacco plants was described by using high performance liquid chromatography with fluorescence detector. The results indicated that, the contents of VB6 in leaves, tender stem and roots were 2.9, 1.7 and 3.0 μg/g fresh weight, respectively. Leaves of tobacco plants grown on MS basal media exhibited a high content of 3.9 μg/g fresh weight. The constituent ratio of B6 vitamers we