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名词解释 基因工程:是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。 重组DNA技术：是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。 载体：将外源DNA运送到宿主细胞的一个工具（化学本质：DNA） 质粒：是存在于细菌细胞质中独立于染色体而自主复制的共价、闭合、环状双链DNA分子（在分子已学过） 溶源状态：λ噬菌体感染野生型大肠杆菌后，只有一部分细胞进入裂解循环。大多数感染的大肠杆菌裂解受挫，λ噬菌体DNA直接整合到宿主细胞的染色体DNA上，并不裂解细菌，这种情况称为溶源状态。 工染色体载体：指人工构建的含有天然染色体基本功能单位的载体系统。 DNA的体外重组：是从不同来源的DNA上将待克隆的DNA片段切下，同时切开对应的载体NA分子，然后将两者连接成一个杂合分子。 限制性核酸内切酶：一类能识别dsDNA分子内部的特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸酶（分为I、II、III，我们常用的是II） 回文序列：指在双链DNA序列中按确定的方向阅读，双链中的每一条链的序列都是相同的 粘性末端：在对称轴5’侧或3’切割底物, 使得DNA双链交错断开，产生具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新环化起来 平端末端：在对称轴上同时切割DNA的两条链，产生的末端平整，不易于重新环化 稀切酶：在DNA分子中出现的几率低，故称之为稀切酶。识别序列比较长；富含AT或富含GC 同裂酶：来源于不同物种但能识别相同DNA序列的限制性内切酶，切割位点可以相同也可以不同 同尾酶：来源各异，识别的靶序列也不相同，但切割后的DNA片段具有相同的黏性末端，这样的一组限制性内切酶称为同尾酶。（当把同尾酶切割的DNA片断与原来的限制性内切酶切割的DNA片段连接后，原来的酶切位点将不存在，不能被原来的限制性内切酶所识别） 1个酶活单位：在最适反应条件下，在20ul反应液中反应1小时，使1ug λDNA（标准DNA）完全消化所需的酶活性称为1个单位。 DNA聚合酶：能以DNA或RNA为模板催化合成与模板互补的一条子链DNA的一类酶 DNA连接酶：对DNA分子进行切割、连接，综合运用各种酶，可产生不同的变化。 转化：指宿主细胞直接吸收外源DNA分子，并获得某些新遗传性状的生命过程。 转化子：通过转化方式而形成的杂种后代（含有外源基因的受体细胞或接纳载体或重组DNA的转化细胞）。 感受态细胞：处于最容易吸收外源DNA的状态的细胞 电穿孔转化法：利用高压电脉冲作用，在大肠杆菌细胞膜上进行电穿孔，形成可逆的瞬间通道，促进外源DNA的有效吸收。 转化率：每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体细胞的分子数。 转化细胞的扩增: 指转化完成后细胞的短时间培养，往往与转化偶联在一起 重组子：含重组DNA的转化子 目的重组子：含目的基因的重组子 目的基因的克隆：从生物体基因组中分离出目的基因，建立高效表达系统 基因库：特定生物体全基因组的集合 基因文库：通过克隆的方法将某一生物的基因组DNA或mRNA保存于适当宿主菌中形成的转化子群。 基因文库的完备性：在构建的基因文库中任一基因存在的概率 cDNA文库：某生物mRNA反转录产生cDNA片段分别与合适的克隆载体相连，通过转化贮存在一种受体菌的群体之中，把这种包含某生物基因组全部基因cDNA的受体菌群体 染色体歩移法：以一系列头尾相互重叠探针筛库，类似于从分子标记序列开始通过一系列相互重叠的克隆向目标基因的“行走”，故称为染色体步移。 核糖体结合位点：mRNA翻译的起始效率主要由其5‘ 端的结构序列所决定，称为核糖体结合位点 密码子的偏爱性：不同的生物，甚至同种生物不同的蛋白质编码基因，对简并密码子使用频率并不相同 包涵体：在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子，它们致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性的结构称为包涵体 包涵体的复性：通过缓慢去除变性剂使目标蛋白从变性的完全伸展状态恢复到正常的折叠结构 融合蛋白：除了直接表达异源蛋白外，还可将外源基因与受体菌自身的蛋白质编码基因拼接在一起，并作为一个开放型阅读框架进行表达。由这种杂合基因表达出的蛋白质称为融合蛋白。 重组质粒的宏观逃逸率：当含有重组质粒的工程菌在非选择性条件下生长时，培养系统中一部分细胞不再携带重组质粒，这些空载细胞数与总细胞数之比称为称为重组质粒的宏观逃逸率 转基因: 指在DNA操作过程中整合到动植物受体细胞染色体上的外源基因 转基因技术: 转基因的重组子构建技术、重组分子导入动植物体内的转化技术、转基因在受体细胞染色体上的稳定整合及可控性表达技术