中药秦艽提取物抑制人晶状体上皮细胞迁移的研究.docVIP

中药秦艽提取物抑制人晶状体上皮细胞迁移的研究 　　[摘要] 目的 为了验证中药秦艽提取物抑制培养的人晶状体上皮细胞迁移的作用，寻找防治后发障的新药物。方法 晶状体上皮细胞长成单层后，分别加入1000、500、250、125和62.5 mg/L的秦艽提取物，培养24 h，观察细胞毒性，确定药物的半数毒性浓度。细胞用1 mL加样器枪头划痕，分别加入100、10、1、0.1 mg/L秦艽提取物，培养24 h。对细胞进行照像，测出实验前后的细胞痕的宽度，计算出细胞迁移距离，测定药物的半数有效浓度及计算秦艽提取物的治疗指数。 结果 秦艽提取物半数细胞毒性浓度为421.7 mg/L。以秦艽提取物浓度对数与迁移距离做回归分析，结果显示相关系数为-0.966，有显著性差异（P = 0.034）。秦艽提取物的半数有效治疗浓度为0.38 mg/L。秦艽提取物治疗指数为1110。 结论 秦艽提取物可抑制晶状体上皮细胞的迁移，具有低毒、高效的特点，有望成为防治后发障的有效药物 　　[关键词] 秦艽提取物；晶状体上皮细胞；迁移；后发障 　　[中图分类号] R776.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）24-0001-03 　　后发障是白内障手术后二次致盲的主要原因，虽然Nd：YAG激光可治疗，但存在多种并发症，如黄斑囊样水肿、视网膜脱离和眼压升高等，因此，研究药物防治后发障具有实际意义。抗代谢药虽可抑制后发障的发生，但其毒副作用较多。研究发现，中药中有些具有抗炎作用的药物可抑制细胞的增殖，但对抑制细胞迁移方面的报道较少。本文中，我们发现秦艽提取物可抑制培养的人晶状体上皮细胞的迁移，有望成为防治后发障的有效药物。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验药物 　　秦艽提取物。取秦艽，加8倍量水煎煮三次，每次1.5 h，滤过，合并滤液，滤液在50℃～60℃减压浓缩至相对密度为1.11～1.15，加乙醇使含醇量达80%，静置12 h，滤过，回收乙醇至无醇味，加水稀释至与药材量之比为2∶1，静置12 h，滤过，滤液加到已处理好的SP70大孔吸附树脂柱，树脂与药材量之比为1∶1.5，依次用5%、40%乙醇溶液（5倍柱体积，2倍柱体积/h）梯度洗脱，收集40%乙醇洗脱液，减压浓缩成稠膏，稠膏干燥，即得。 　　1.2 细胞和细胞培养液 　　人晶状体上皮细胞系（SRA 01/04）由本单位张炜研究员惠赠。F12/DMEM营养液（Hyclone）；胎牛血清、Hepes液、胰蛋白酶/EDTA和D-Hanks液（Gibco）；L-Glu（Sigma）；青霉素、链霉素（华北制药）。配制200 mL细胞培养液：F12/DMEM营养液165～185 mL，血清10～30 mL，双抗（青霉素2万U/mL，链霉素20 mg/mL）1 mL，L-Glu（200 mmol/L）1 mL，Hepes液2.5 mL。再加入胎牛血清，分别配成含血清为5%、10%和15%的细胞培养液备用。 　　1.3 人晶状体上皮细胞的培养 　　使用15%血清培养液进行传代培养，加D-Hanks液冲洗，胰蛋白酶/EDTA（0.25%胰酶、0.03%EDTA）作用2 min，吸出消化液，加入营养液，将细胞加入96孔培养板中继续培养。 　　1.4 药物细胞毒性的测定 　　96孔培养板的细胞长成单层后，加D-Hanks液冲洗，分别加入1000、500、250、125和62.5 mg/L的秦艽提取物的营养液，培养24 h，观察细胞毒性，确定药物的半数毒性浓度（IC50）。 　　1.5 比较不同浓度血清对细胞迁移的影响 　　96孔板中细胞长满后，用1 mL加样器枪头划痕，分别加入10%和5%的血清培养液，培养24 h，对细胞进行照像，测出实验前后的细胞痕的宽度，计算出细胞迁移距离。 　　1.6 秦艽提取物对细胞迁移的作用 　　96孔板中细胞长满后，用1 mL加样器枪头划痕，分别加入用含5%血清的营养液配制浓度为100、10、1、0.1 mg/L秦艽提取物，培养24 h，对细胞进行照像，测出实验前后的细胞痕的宽度，计算出细胞迁移距离，计算秦艽提取物的半数有效浓度（EC50）和治疗指数（TI）。 　　1.7 统计学处理 　　采用SPSS16统计学软件进行统计处理，血清对细胞迁移距离影响采用t检验，药物浓度与迁移的关系采用回归分析。 　　2 结果 　　2.1 秦艽提取物的毒性 　　不同浓度的秦艽提取物对细胞的毒性见表1，药物毒性随浓度的减少而降低，半数细胞毒性浓度（IC50）为421.7 mg/L。 　　2.2血清浓度对细胞迁移的影响 　　细胞培养液中不同血清浓度对晶状体上皮细胞迁移有一定的影响，24 h后，10%血清培养液细胞的迁移距离为（0