国产蜂胶提取物中白杨素与高良姜素的含量测定.docVIP

国产蜂胶提取物中白杨素与高良姜素的含量测定 　　【摘要】 目的 考察国产市售蜂胶提取物中部分黄酮的含量。方法 采用高效液相色谱法分析测定不同蜂胶提取物中白杨素与高良姜素，进行含量比较。结果 只有30%的样品符合国家药品标准。结论 应重视蜂胶对照药材的代表性与各指标成分之间的比例。 　　【关键词】 国产蜂胶；白杨素；高良姜素；含量测定 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.06.040 文章编号：1004-7484（2013）-06-2898-01 　　蜂胶是西方蜜蜂（Apis mellifera）采集某些植物嫩芽分泌物或伤处流出的油脂、粘液、树脂、橡胶等，并混入蜂蜡和其它分泌物，经咀嚼加工而成的黏稠物质。根据植物源不同，蜂胶分为巴西型蜂胶和欧洲型蜂胶[1]，前者仅存在于巴西；后者则在欧洲、亚洲及非洲都有分布。我国原产的中华蜜蜂几乎不产蜂胶，国产蜂胶的来源一般是意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica），植物源主要是杨树。 　　蜂胶含树脂约50%-60%，蜂蜡30%，芳香挥发油10%和一些花粉等夹杂物。主要有黄酮类、酚类、内酯、香豆精类、醛、酮、甾类化合物，还含有维生素，矿物质等[2]，具有丰富的营养价值以及药用价值。由于蜂胶在采集过程中掺杂有大量的杂质，不能直接供药用。因此，国内蜂胶供应厂家采用乙醇对蜂胶进行提纯，以蜂胶块或者蜂胶粉的形式作为原料销售。 　　中国药典自2005版开始将蜂胶收录为法定中药材[3]。但尚未对提纯蜂胶质量做进一步的要求。本文搜集了国内主要蜂胶提取物供应商提供的样品进行了含量测定，为进一步制定蜂胶提取物的标准提供参考。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料 不同来源的蜂胶样本从市场购得，分别来自河南、浙江、广东、云南等地。河南省蜂胶加工厂家最多，所以来源于河南省的样本占绝对多数。将采集的蜂胶粉碎过40目筛，混匀保存。 　　1.2 仪器与试剂 Agilent1260高效液相色谱仪，包括四元泵、脱气机、紫外检测器、柱温箱。甲醇（色谱纯）、磷酸（分析纯）、水（超纯水）。高良姜素与白杨素购自中国食品药品检定研究院（含量测定用）；蜂胶对照药材购自中国食品药品检定研究院。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件[4] 色谱柱：AgilentTC-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-0.15%H3PO4（二者比例64：36），流速0.8ml?min-1，进样量10μL（定量环）。检测波长268nm。理论塔板数不低于6000。 　　2.2 对照品溶液制备 对照品溶液的配制：分别称取5mg干燥至恒重的对照品，用甲醇溶解，配制成1.0mg?ml-1对照品储备溶液，避光保存。使用前稀释至0.03mg?mL-1（白杨素）与0.02mg?ml-1（高良姜素）。 　　2.3 样品溶液制备 蜂胶溶液的制备：取样品粉末约0.1g，精密称定，置索式提取器中，加丙酮100ml，加热回流至提取液无色，提取液回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，测定白杨素（C15H10O4）和高良姜素（C15H10O5）的含量。 　　2.4 标准曲线 将对照品溶液，按2.1色谱条件，分别以2l，4l，8l，10l，16l依次进样。根据各对照品进样质量与峰面积分别绘制对照品标准曲线。计算得标准曲线方程：白杨素：Y=222.4x-10.2，r=0.9992；高良姜素：y=214.3x+12.06，r=0.9994相关系数表明，在线性范围内各对照品质量与峰面积相关性良好。 　　2.5 方法学考察 　　2.5.1 精密度试验 取同一份蜂胶样品溶液，连续进样5次，考察测定峰相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果表明，各测定色谱峰保留时间的RSD均在0.5%以内，相对峰面积的RSD均在1.0%以内。 　　2.5.2 稳定性试验 取同一份蜂胶样品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h进样，测得各特征色谱峰的相对保留时间的RSD均在0.8%以内，相对峰面积RSD均在1.1%以内，表明样品溶液在12h内基本稳定。 　　2.5.3 重复性试验 取同一批蜂胶样品溶液5份，按供试品溶液的制备方法，分别制成供试品溶液，结果表明，测得各色谱峰的相对保留时间的RSD均在0.6%以内，相对峰面积RSD均在3.5%以内。 　　2.6 含量测定结果 见表1。 　　3 讨 论 　　3.1 蜂胶质量问题是近年来保健品行业的一个热点。2010版药典对蜂胶含量测定项目的要求是白杨素不得少于2.00%，高良姜素不得少于1.00%[4]。根据本实验的测定，不少厂家的蜂胶尚达不到含