实训厌氧菌鉴定班级14检验302组别第六组组员孙雯玲(主写.docVIP

实训： 厌氧菌鉴定 班级：14检验302 组别：第六组 组员：孙雯玲(主写)1411321056陈丽君1411321055 陈杰1411321053 【实验目的】 掌握破伤风芽孢梭菌和产气荚膜梭菌的鉴定要点、鉴定依据和检验方法。 掌握细菌在各种培养基的生长现象和细菌生化反应的操作方法。 熟悉细菌培养方法和细菌生化反应的结果判断及报告方式。 【实验步骤】 分离培养：将破伤风芽孢梭菌和产气荚膜梭菌分别接种于血平板、卵黄琼脂平板、庖肉 卵黄琼脂平板 破伤风芽孢梭菌 菌落直径2-3mm，灰白色，圆形，表面光滑，半透明，边缘不整齐，边缘疏松呈羽毛状，无溶血。 菌落直径5-6mm，乳白色，圆形，表面不光滑，边缘不整齐。 产气荚膜梭菌 菌落直径2-3mm，灰褐色，圆形，表面光滑，边缘整齐，半透明，伴有α-溶血和β-溶血。 菌落直径5-6mm，乳白色，圆形，表面光滑，边缘不整齐，菌落周围出现乳白色环。 庖肉庖肉 牛乳培养基 破伤风芽孢梭菌 培养基变浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生少量气体，有腐败性恶臭。 无变化 产气荚膜梭菌 培养基变浑浊，肉渣不被消化，变成粉红色，产生大量气体，导致用于封闭的凡士林被顶起。 酪蛋白凝固，产生大量的气体冲击凝固的酪蛋白形成分散的蜂窝状，出现“汹涌发酵”现象。 破伤风芽孢梭菌 从左到右：葡萄糖，乳糖，麦芽糖，蔗糖 产气荚膜梭菌 从左到右：乳糖，葡萄糖，麦芽糖，蔗糖 菌种 结果 生化管类型 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖 破伤风芽孢梭菌 - - - - 产气荚膜梭菌 + + + + 革兰染色: 破伤风芽孢梭菌 革兰染色: 产气荚膜梭菌 芽孢染色：破伤风芽孢梭菌 芽孢染色：产气荚膜梭菌 革兰染色镜检结果 菌种 染色性 形态 排列 破伤风芽孢梭菌 革兰阳性 鼓槌状、杆状 散在排列 产气荚膜梭菌 革兰阳性 杆状 散在或短链状排列 芽孢染色镜检结果 菌种 菌体颜色 芽孢颜色 排列 破伤风芽孢梭菌 蓝色 红色 散在排列 产气荚膜梭菌 蓝色 红色 散在或短链状排列 【实验结果分析】 庖肉”现象，产生大量气体，是因为培养基中含有较多的硫氢基团，硫氢基团起还原作用，为厌氧菌提供良好的生长环境，从而产生甲基硫醇及硫化氢气体使凡士林被冲开。在疱肉培养基中产气荚膜梭菌不消化肉渣，所以肉渣呈粉红色。而破伤风芽孢梭菌因为消化部分肉渣使肉渣微变黑。 牛乳培养基:产气荚膜梭菌能迅速分解乳糖产酸，使培养基中的酪蛋白凝固，并产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲散形成分散的海绵状碎块将液面的凡士林向上挤压甚至冲开木塞，称“汹涌发酵”现象。 糖（醇、甘）类发酵试验：不同细菌含有发酵不同糖类的酶，因而分解糖的能力各不同，其产物也不一样，多糖→单糖→丙酮酸（或产气）→酸性产物→PH(↓)→呈酸性变色，溴甲酚紫为指示剂。试验中，破伤风芽孢梭菌均不分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖生化试验管均呈紫色为阴性。产气荚膜梭菌均能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖使培养基呈酸性使指示剂溴甲酚紫变黄，为阳性。 根据CLSI选药：破伤风芽孢梭菌：青霉素、四环素、万古霉素、甲硝唑 产气荚膜梭菌：甲硝唑、 阿莫西林、克林霉素、头孢、莫西沙星