氧化应激和慢性炎症影响睾丸间质细胞衰老的作用机制研究.pdf

材料与方法………………………………………………………99 结果………………………………………………………………104 附图………………………………………………………………109 讨{仑………………………………………………………………118 小结………………………………………………………………l2l 参考文献…………………………………………………………122 结论……………………………………………………………………13O 附录………………………………………………………………………．．131 综述睾丸间质细胞老化及其老化过程中睾酮合成下降的机理………132 致谢……………………………………………………………………144 个人简历…………………………………………………………………145 中文摘要 氧化应激和慢性炎症影响睾丸间质细胞衰老的 作用机制研究 摘 要 血清睾酮含量下降是人类和啮齿类动物雄性衰老的主要表现，并出现 生殖功能、肌力、骨密度以及其他生理指标的下降。睾酮主要是在腺垂体 hormone，LH)刺激下由睾丸间质细胞合成 分泌的黄体生成素(1uteinizing 分泌的。尽管血清睾酮水平下降应与下丘脑一垂体轴功能改变有关，但是 血清LH水平随年龄的增加并没有明显改变，故初级性腺成了研究焦点。 对年轻和老年大鼠睾丸间质细胞计数表明损失的睾丸间质细胞并不能解 释年龄有关的睾酮水平降低，因此睾丸间质细胞功能的变化与之关系更密 切。 近年来，氧化应激一直备受关注。“自由基学说”认为衰老的细胞处 于一种氧化和抗氧化失衡状态，无法清除体内多余的活性氧(reactive oxygenspeciesROS)，导致细胞内大分子物质的氧化损伤，包括细胞膜脂 类物质的过氧化、酶失活、蛋白质氧化和DNA损伤，同时衰老的机体也 形成了一套氧化应激应答系统来应对自由基。抗氧化酶在保护细胞免受自 factor 由基损伤中扮演重要角色。核因子NF．E2相关因子(Nuclear 2-relatedfactor erythroid element，√蚯冱)的相互作用来调节抗氧化酶的转录，是迄今为止 responsive 发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路。慢性炎症也是衰老器官生理功 factor 能下降的一个重要因素。NF—rd3(Nuclearbeta，NF．1出)作为一 kappa 个氧化还原状态敏感的转录因子蛋白家族成员之一，可调控促炎症因子的 表达，包括：TNF．Q、IL．1 NF．r．B转录因子的激活和慢性炎症似乎成了一个普遍现象。 本研究旨在利用功能学、形态学和分子生物学等方法，从睾丸组织、 间质细胞两个水平，以血清睾酮的年龄性下降为着眼点，探讨Nrf2抗氧 化应激通路以及NF—r．B慢性炎症通路在睾酮下降过程中的作用机制。研 条通路的年龄性变化。 (2)分离培养原代衰老睾丸间质细胞，证实ROS 中文摘要 一p38 切相关的。 (3)确定生命不同阶段的适度运动在年龄性睾丸生理功能下 降过程中的不同作用。 第一部分SAMs小鼠睾丸组织氧化应激和炎症反应的加龄变化及Nrt2 和NF．KB在此过程中的作用 目的：雄性体内年龄性血睾酮水平下降，导致机体生理功能下降。但 是睾酮下降的具体机制还不清楚。本研究中，我们探讨了SAMP8 mouse 8)和其对照SAMRl雄性小鼠血睾酮水平 (senescence．accelerated 年龄性(2，4，8，10月龄)下降过程中，氧化应激和炎症反应的变化，并检 测了Nrf2和NF．v．B信号通路在此过程中的作用。 方法： 由河北医科大学第一医院提供，每