转bax和tdc基因对喜树碱及10-羟基喜树碱生物合成的影响.pptVIP

转bax和tdc基因对喜树碱及10-羟基喜树碱生物合成的影响.ppt

  1. 1、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
转bax和tdc基因对喜树碱及10-羟基喜树碱生物合成的影响

喜树愈伤培养基成分: WPM+2,4-D 1.0 mg/L +6-BA 1.0 mg/L WPM基本培养基: 实验步骤 1.将喜树愈伤组织从培养瓶转移到无菌操作台上的滤纸。 2.用解剖刀将愈伤组织切成绿豆大小的小块,要去除掉死组织,每个试剂 瓶接种3块,接种完成后用封口膜扎紧瓶口。 3.置于25度 1500-2000Lux的光照下培养。每周观察一次,观察2周,记录 结果。 一 喜树愈伤组织的继代培养 二 喜树悬浮细胞系的建立 1.取喜树愈伤组织,在灭过菌的滤纸上用解剖刀将其尽量切散。 2.将散碎的愈伤组织转移入三角摇瓶中,在摇床上以80-120转/分,25度, 黑暗条件下培养。 3. 每周观察一次,观察2周,记录结果。 实验一 喜树细胞的培养 实验原理 喜树(Camptotheca acuminata Decne.)为珙桐科喜树属植物,又称旱莲木,是我国的特有植物。 其次生代谢产物(喜树碱、10-羟基喜树碱等)具有抗癌活性。 喜树碱及其衍生物在植物体内含量很低,特别是喜树的天然资源有限,且大量采伐必然带来严重的生态环境问题。 研究目的 将从喜树中克隆的tdc基因tdc1和tdc2分别转化到喜树中使其过表达,研究关键酶基因过表达对喜树次生合成代谢的影响,以期达到喜树碱和10-羟基喜树碱含量增产目的。 主要研究内容 喜树tdc同源基因的克隆及表达载体的构建。 转tdc基因对喜树碱和10-羟基喜树碱合成的影响。 喜树碱10-羟基喜树碱提取方法的优化及RP-HPLC荧光检测方法的建立 一、根癌农杆菌介导的tdc同源基因对喜树的遗传转化的研究 pBIN-35S-tdc-GFP表达载体的构建 pBIN-35S- tdc1-GFP的构建 pBIN-35S- tdc2-GFP 的构建 转基因细胞系的获得与鉴定 获得tdc1抗性愈伤;B:继代两周的tdc1愈伤;C:获得tdc2抗性愈伤;D:继代两周的tdc2愈伤 基因 外植体 外植体总数/个 抗性愈伤数/个 转化率/% tdc1 幼叶 58 36 62.7 幼茎 60 44 73.3 tdc2 幼叶 53 34 64.2 幼茎 56 38 67.9 PCR检测 A B A:转tdc1的PCR检测 B:转tdc2的PCR分析 RP-HPLC荧光法检测喜树碱含量 高效液相色谱条件: 色谱柱:XTerra RP18柱(5μm,4.6×250mm);流动相:乙腈:水(20:80);入射波长:550 nm;激发波长:363nm;流速:1mL/min;进样量:10μL;柱温:30℃。 A B 标准样品 待测样品 转基因细胞系喜树碱和10-羟基喜树碱含量 基 因 CPT含量/‰ HCPT含量/‰ 非转基因 0.0012 0.0234 转tdc1基因 0.0026 0.0528 转tdc2基因 0.0021 0.0472 通过提取转基因和非转基因材料的次生代谢物,比较它们细胞中的喜树碱和10-羟基喜树碱含量结果可知,tdc基因能一定程度上促进喜树碱和10-羟基喜树碱的积累。 实验内容 一 喜树愈伤组织的继代培养 二 喜树悬浮细胞系的建立

文档评论(0)

daoqqzhuan3 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档