人雄激素受体激结合部基因在大肠杆菌中的表达及其产物的纯化和复性研究.pdf

摘 要 本实验对人雄激素受体(HumanAndrogen Receptor,HAP．)激素结合部 (Ligand-binding 表达产物在宿主菌内的存在形式和表达产物的纯化及其复性方法进行了研究。 ， (结果表明：1．人雄激素受体激素结合部基因在E．coliGI，：。菌株中稳定表达的优 化条件：繁殖培养温度300C，振荡速度为200转／分，培养时间以对半稀释 ／m1)，接种于诱导培养基中的菌液稀释比为h100，300C，200转／分，振荡 培养时间以OD。值达0．44．6为止，诱导培养时，诱导温度为370C，诱导剂 色氮酸终浓度为190 p．g／ml，振荡培养速度为200转／分，诱导时间为4小时。 2．表达产物以不溶的包涵体形式存在。3．包涵体经分离、洗涤、溶解和Sephadex G．200柱层析，得到了电泳单点纯的表达产物。4．在三种复性方法中，以含 O．4mol／L Arg的缓冲液对表达产物的复性效果较好，与睾酮结合率可达42％， 其效果优于去除变性剂法和谷胱甘肽氧化还原法(与睾酮结合率分别为30％ 和15％)。，—丫 关键词：人雄激素受体激素结合部 基因表达 蛋白质纯化 蛋白质复性 on Fusion of Study HAR Gene expression LBD Fragment in E．coli and Product 上fLian (CollegeofAnimal andveterinaryScience,SouthlVestAgricultural ABSTRACT on ofHARLBD in Study Thioredoxinfusion expressiongene Fragment gene of and expressionsystem，condition renaturationof product，purification product weTecarriedout． Theresults in at of indicated：Incubating 30。C，shaking 200r／rain，E．coli speed tothe that theconcentrationofcell lxl09 growedpoint from to2x109cells ranged onemiltercell to100