伪狂犬病病毒新株的分离鉴定及其gd和ge基因的克隆与序列分析.pdfVIP

摘 要 从新疆某猪场病死仔猪的脑组织中分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)毒 株 本文通过兔体接种 BHK-21细胞培养 病毒毒力的滴定 中和试验 电镜 观察 实验兔 仔猪回归试验 PCR检测病毒等多种方法对该分离株进行了鉴定 结果发现分离的病毒接种实验兔后发生奇痒并麻痹致死 BHK-21细胞培养盲传4 -10.87 代出现典型细胞病变 用 BHK-21细胞测定其毒价 TCID为 10 /0.1mL电镜 50 观察可见呈现典型PRV病毒形态学特征 动物试验兔出现典型奇痒症状 仔猪出 现典型的症状和病理变化 分离的病毒能中和 PRV标准阳性血清 PCR体外扩 增可见其与鄂A株在同一水平位置上有相同的电泳带 根据此分离病毒株的上 述特性 鉴定其为猪伪狂犬病病毒 并命名为XIN-W株 随后研究了XIN-W株的基因特征和分子流行病学背景 对猪伪狂犬病病毒 XIN-W株相关的毒力基因gDgE序列进行了测定和分析 根据已发表的PRVgD gE基因序列 设计合成了两对引物 经PCR反应分别扩增得到了全长为1209bp 1743bp的gDgE全基因序列 将它们克隆到pGEM-T-Easy载体中 并转化JM109 挑取阳性菌落的质粒进行PCR酶切 测序鉴定 与其它参考毒株的gDgE基因 进行比较 结果表明 XIN-W株与其它毒株相比 gDgE基因核苷酸序列的同源 性分别为 97.9%-99.3%,98.0%-98.7%;氨基酸序列的同源性分别为 97.0%-99.3%,97.1%-98.1%不同的PRV毒株间gDgE基因在核苷酸水平和氨基酸 水平高度保守 遗传进化树显示 XIN-W株和国内其它毒株起源相同 属同一进 化分支 该研究从病原 分子水平证实新疆存在PRV野毒株 对于新疆PRV的流行病学 研究及诊断和防治具有重要意义 关键词:伪狂犬病病毒 分离 鉴定 gDgE基因 序列分析 Abstract OnePseudorabies( Aujeszkys disease domestic pigs originating from Xinjiang.Thetered then drained monolayers of- BHK Pseudorabies virus -10.87 using serumneutralization test(SNT).TCID of virus was 10/0.1mL. 50 virus andA virus characterisation PRV and named XIN-W strain epidemiological background -W strain were determined. Accordi gD and a 1743bp gE genecompleted -T-Easy vector. After predicted amino acid were compared homology respectively is-99.3%,98.0%- 97.9% -99.3%,97.1%-98.1%. At the nucleotide and -W and others d belong to same evolution embranchment. ep