人朊蛋白基因的隆表达及抗血清的制备.pdf

摘 要 的序列M13899进行同源性分析，结果发现核苷酸序列同源性为99．6％，氨基酸序列 同源性99．8％。以HoPRNP．T质粒为模板，扩增出编码人成熟朊蛋白(mature prion coli BL21(DE3) 重组质粒pET-homPrP。经酶切鉴定后电转化pET-homPrP至宿主菌E 波裂解重组菌体后用Ni．NTA亲和层析法纯化融合蛋白，以SDS．PAGE检测纯化的表 达产物，表明亲和层析法纯化的融合蛋白纯度可达到90％。再以SAF70进口单抗为检 coli 免疫原，以含有pET30a(+)空载体的EBL21(DE3)的菌体蛋白作为对照免疫原，分 雌性小鼠，在第3周和第5周以同法、同剂量弗氏不完全佐剂乳化的两种免疫原分别 进行加强免疫，第3次免疫3天后摘眼球取血，用间接ELISA法检测抗血清的效价。 有很强的特异性。此实验结果为进一步研究人朊蛋白结构和制各出相应的单克隆抗体 奠定了基础。 关键词：人：朊蛋白基因：克隆；原核表达；抗血清制各。 bummary _ The human openreadingframe(ORF)ofprionproteingene(PRNP)was amplifiedby chain the ofthetotal polymerasereaction(PCR)with DNAsextractedfromthe template human clonedinto 8-TvectortoconsVuctthe blood，which recombinant pMDl plasmid and thePRNP of HOPRNP一丁Bysequencinganalyzing genestherecombinant plasmid HOPRNP—Twith that wereindicatedthenucleotideandaminoacid of DNAstar,it sequence thePRNPexhibited99．6％and with M13899 gene 99．8％homologyrespectively published inGenBank．Therecombinant was constructed the plasmidpET-homPrP