两种蓝藻对wsv潜伏感染对虾的影响.pdfVIP

Classificatory number confidential UDC** Student number DALIAN OCEAN UNIVERSITY MASTER DISSERTATION The impact of two cyanobacteria specie to WSSV carried Litopenaeus vannamei Li Fan Supervisor Li Zhuojia Wu Yin Professional name Aquaculture science Date submitted paper June， 2014 摘要 摘 要 在以往的对虾养殖生产跟踪调调研中，发现虾池藻相结构及变化与虾病发生 有一定相关性，虾池优势蓝藻与养殖对虾疾病的爆发存在着某些方面的联系，可 能成为WSS 爆发的潜在危机。但虾池优势微藻、WSSV 、养殖对虾三者之间具 有怎样的关系？相关的研究报道尚鲜见。本研究以虾池的三种优势微藻（蛋白核 小球藻、铜绿微囊藻，绿色颤藻）为对象，研究了三种优势微藻与游离 WSSV 的关系、三种优势微藻对对虾的影响、两种优势蓝藻对WSSV 感染对虾的影响。 主要内容如下： 1. 三种虾池优势微藻与环境游离WSSV 的关系 采用BG11 培养液对铜绿微囊藻、绿色颤藻和蛋白核小球藻进行培养，三种 微藻分别设置高密度组、中密度组、低密度组，同时设置对照组（不加藻）。在 各实验组的培养液中分别加入 WSSV 粗提液，使 WSSV 初始浓度为 4.32×105 copies/ml 。分别在第2h ，24h ，72h，120h 吸取藻液，离心分离上清，沉淀的藻 体用PBS 重悬，以荧光定量PCR 检测上清及藻体悬浮液中的WSSV 拷贝数，同 时计算藻细胞数量。采用偏相关分析法分析藻体WSSV 量、上清WSSV 量及藻 细胞数量的关系。 结果发现，2 h 时，铜绿微囊藻、绿色颤藻和蛋白核小球藻三种微藻的高、 5 中、低密度组上清WSSV 量均为 10 copies/ml ，高、中、低密度组藻体WSSV 4 4 3 量分别为10 copies/ml 、10 copies/ml 和10 copies/ml 。24 h 时，三种微藻的高、 中、低密度组上清的WSSV 量分别降低了 98.1%、97.9%、87.6%，高、中密度 组藻体的WSSV 量分别降低了98.6%、90.1%，均较2 h 时降低了一到两个数量 级，降低幅度均达到显著（P0.05 ），低密度组藻体 WSSV 量降低量不显著 （P0.05 ）。72 h 时，各组上清和藻体的WSSV 量继续减少，绝大部分游离WSSV 已消失。偏相关分析发现，藻体携带WSSV 量与藻细胞数量无显著的相关关系 （P0.05 ）。各组的WSSV 总量均呈持续下降趋势，其中各密度微藻组WSSV 总 4 3 5 量在24 h 内降低至10 copies/ml ~ 10 copies/ml ，对照组仍为10 copies/ml ；各密 3 4 度微藻组WSSV 总量在72 h 内降低至10 copies/ml ，对照组仍为10 copi