两种肿腿蜂的核及rapd研究.pdfVIP

摘要 Xiao 川硬皮肿腿蜂sYchuanensfsXiao和管氏肿腿蜂Sclerodermaguani et idae，天牛肿腿蜂属Sclerderm Wu属膜翅目Hymenoptera、肿腿蜂科Bethyl asp，都是外寄生蜂，是钻蛀性害虫的重要天敌。本文对这两种肿腿蜂进行了细 胞学研究，为揭示其种间关系、起源和演化提供必要的资料；并对它们及川硬皮 肿腿蜂种内四种分化类型进行RAPD遗传多样性分析，为肿腿蜂的进一步研究如 遗传育种奠定基础，从而为研究肿腿蜂的变异时期、变异机制、变异因素及诱导 良性变异做准备。 ． 在研究方法和制片技术探究的基础上，本研究对其进行了核型分析，结果如 下： 1)最佳制片流程：肿腿蜂雌成虫卵巢在0．01％秋水仙素水溶液中预处理 染色液染色30min，冰冻揭片(液氮)，中性树胶封片。 ●√ sfchuanensfs 2)两种肿腿蜂染色体数目均为2n(早)=30，川硬皮肿腿蜂S XiaoetWu核型公式为2n(早)=4m+18sm+8st，核型为2B型。 guanf 本试验对川硬皮肿腿蜂和管氏肿腿蜂基因组DNA的提取方法和RAPD—PCR扩 增反应体系及程序优化方法进行了探讨，结果如下： 1)基因组DNA提取结果显示，蛋白酶K法得到的基因组DNA浓度合适，蛋 白质含量低，可以用于PCR扩增。 DNA聚合酶1．5U，DNA浓度 2)最佳体系为25ui中MgCl：3．5mi／L，Taq 4C预变性lmin45sec， 37．5ng，dNTPl50uM／L，DTTO．3mM；较优化的扩增程序为94 3)用筛选出来的8个引物对川硬皮肿腿蜂的四种分化类型及管氏肿腿蜂进 行扩增，共扩增出48个位点(分子量在50～]000之间)，平均每个引物产生6 个，其中多态性位点33个，占总位点数的68．9％。表明它们之间具有丰富的多 态性。 4)引物D20中分子量为398bp的带可能是小型个体的标记带：引物BIO中， 分子量为602bp的带可能是川硬皮肿腿蜂寄生率高的特异性标记带；引物B16 中分子量为446bp的带可能是体形较大的这种外型特征的特异性标已带。 7、C9、D20 j)川硬皮肿腿蜂种内各群体在引物A19、B10、B11、B16、B1 和Fl的平均shannon信息指数为0．1220，表明川硬皮肿腿蜂种内有较大的遗传 多样性，存在相当的遗传分化。而川硬皮肿腿蜂种内的四种分化类型中，I和II 之间的遗传相似度为0．8371，III和IV之间的遗传相似度为0．8710，均大于它 们分别与其它两种类型的遗传相似度；聚类分析显示I和II首先聚在一起，III III、IV，II和III、IV之间在基因上的差异较大。 6)川硬皮肿腿蜂和管氏肿腿蜂之间的平均遗传距离极大为0．3069，川硬皮 肿腿蜂种内四种分化类型的平均遗传距离为0．2395，种间群体的遗传距离大于 种内各群体的遗传距离；聚类分析显示川硬皮肿腿蜂种内各群体优先聚在一起， 然后再于管氏肿腿蜂在较小的遗传相似度聚在一起：表明川硬皮肿腿蜂与管氏肿 腿蜂在基因上的差异比川I硬皮肿腿蜂种内的四种分化类型大，此结论印证了传统 分类的正确性。 关键词：川I硬皮肿腿蜂管氏肿腿蜂核型RAPD Abstract XiaoandSclerodermaXiaoetWuareboth Sclerodermasichuanensis