三江白猪lepin的制备及其对小鼠繁殖性能和脂肪代谢的影响.pdfVIP

摘要 LcpliIl是曲基因的袭达产物，是由脂肪绷胞分泌的一种16kDa的蛋白，与动物的采食挞、 熊囊代巍、繁建与生产靛能懿诱控鸯密韬关系，霹蕾国鳋纛耪步应霜予入帮疃齿类动耪摄食与能 黧平衡的调控。但是对猪的研究才刚刚起步，因此，在体外进行其克隆表达为进～步研究leptin 在改善动物繁殖性能、肉晶品质和治疗人类肥胖症方面的应用奠定了纂础。本研究利用基因工程 鞭瑾及现代分子生镌学蜜验技术研究了妇下内容： 1．三江白猪D6基闲的克隆与序列分析从健康三江臼猪的皮下脂肪组织中提取总RNA， 掇据文献报道的猪幻羹因守到设计引物，采用RT-PCR方漩扩增出硝基因。并将所获褥的辫的 确的质粒进行序列测定，基因序列分析表明与GenBank中猪D6基因的编码序列一致为44lbp， 说明所壳隆的基困正确。 2．三江自猪。6基因在大肠杆荫中的表达殿其多克隆抗体的制备在获得三江自猪D6蒺因 戮大瑟耪蘸8波l(琵3)串，镬强IPTG诱导嚣豹蛋鑫表逸。SDs．熬G￡捡测垂鬃显示，三淡自 猪D6基因张大肠杆菌中得到了正确表达。将柳步纯化的袭达产物作为抗原免疫小白鼠，制备三 滋自猪06慕因的多克隧抗体。同时对表达产物进行复性。成用ELISA检测到较离的多克隆抗体 备的鼠抗血清可以很好地和所表达的蛋白带特异性结合。 3。瑷核表达leptin复性磊对小囊靛繁夔性缝及l§肪调控戆研究到糟小自鼠体内实验检测复 性后leptin的生物学活设。结果表明，复性后的leptin可镶小自鼠的采食量、体麓显著降低：使 小白鼠的初情期提前约6．J天；血清游离脂肪酸、甘油三酯含量也显著下降。体内实验结果说明， 我{}】辑表达熬leptin经鬟性蓐具毒较好熬生物学话蛙。 本实验获得了具有较好生物学活性的重组leptin，为进～步研究谯改善动物赣殖性能、肉品 晶矮和治疗人类肥胖症方面的应用髓定了基础。 关键词：曲基因；瘦蛋白；克隆；原核表达；生物学活性 Abstract isa 16kDa andencodedobese functions of Lcptinprotein se渊涮byadipocytes by gene．Leptin its distributedincentralnervous in and other receptors through system，especiallyhypothalamusmany on on thenucleiin exertsitsinfluencefood peripheraltissues。Byacting hypothalamus,leptin intake, the balanceand can membalismof and leptinregulate glucosefatty energy propagation．Meanwhile itseffects andskeletalmuscles．Alloftheseshowedthat isa acids on through p∞cre鹞，liver l印tin hormone．Theidentificationof enablensto into between multifimctional laptin probe relationship tissue st)astocontro