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第三章 层析概况 层析方法的分类： 薄层层析： 一、常用术语： 二、基本原理 三、色谱参数 范德姆特方程 R 越大，相邻组分分离越好。当R=1.5 时，分离程度可达99.7%，因此R=1.5 通常用作是否分开的判据。 五、层析柱的制备与层析操作 柱层析的设备：层析柱、部分收集器、恒流泵，检测器 1、填料的选择：要分离物质的性质 2、层析柱的选择： 直径与柱长的比例：1:10-1:40 层析柱的床体积是由要处理样品的量来决定的。 3、填料的用量：一般为待分离样品的30-50倍。 4、装柱：装填均匀，松紧一致，没有气泡。 5、上样和洗脱： 上样液体积小于床体积的1/2，体积越小越有助于分离效果。 洗脱液的流速要恰当控制 6、填料的再生：不同基质的再生方法不同。 第二节、薄层层析 薄层层析（thin layer chroomatography TLC）：是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。 根据固定相的种类分类： 吸附薄层层析 分配薄层层析 离子交换薄层层析 优点：展层时间短15min-60min 设备简单，操作方便，既适于分析也适于制备 影响因素少，结果重现性好 显色方法多样，灵敏度高。 操作及注意事项： 1、薄层板的制备 2、点样 3、展层： 选择适当的展层剂 使用恰当的展层装置 4、显色 第三节、聚酰胺薄膜层析 聚酰胺薄膜层析对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺薄膜表面发生吸附、解吸附、再吸附和再解吸附的连续过程，达到分离目的。 * * 做纯化似拂轻尘,制填料如煮小鲜 层析法或称色谱法（chromatography）是一种物理或物理化学的分离分析方法。 柱层析： 吸附剂或有机溶剂液膜 与吸附层析和分配层析同 气相层析 离子交换，亲和，凝胶过滤等填料 随固定相变化而变化 高效液相层析 多缓冲离子交换剂 电荷效应及离子间结合力 聚焦层析 交联葡聚糖凝胶和交联琼脂糖凝胶 排阻效应 凝胶过滤层析 带配基的葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶 亲和力 亲和层析 树脂、离子型纤维素和葡聚糖凝胶，人造沸石。 离子间结合力 离子交换层析 苯基、辛基、丁基葡聚糖凝胶或C18 疏水力和静电引力 反向层析、疏水层析 纤维素、硅藻土、硅胶等 溶解度 分配层析、反向分配层析 硅胶、氧化铝、羟基磷灰石、活性炭等 疏水力和静电引力 吸附层析 基质或载体 原 理 名 称 纸层析： 滤纸分配层析：溶解度，滤纸。 聚酰胺 疏水力和静电引力 聚酰胺薄膜层析 交联葡聚糖 排阻效应 凝胶过滤层析 各种离子交换剂 离子间结合力 离子交换层析 纤维素、硅胶、硅藻土 溶解度 分配层析 硅胶、氧化铝等 疏水力和静电引力 吸附层析 基质或载体 原理 名称 1、固定相：是由层析基质组成。基质包括固体物质（吸附剂、离子交换剂）和液体物质（固定在纤维素或硅胶上的溶液），这些物质能与相关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。 2、流动相：层析过程中推动固定相上的物质向一定方向移动的液体或气体称为流动相。在柱层析时，流动相又称为洗脱剂。在薄层层析时流动相又称为展层剂。 3、层析：以基质为固定相，以液体或气体为流动相，有效成分和杂质在这两个相中连续多次的进行分配、吸附或交换作用，最终使混合物得到分离。 4、操作容量：在特定条件下，某种成分与基质反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量，一般以每克（或毫升）基质结合某种成分的毫摩尔数或毫克数开表示。其数值大表示对某成分的结合力强。 5、膨胀度：在一定溶液中，单位重量的基质充分溶胀后所占有的体积 用Vβ表示。即每克溶胀基质所具有的床体积。一般亲水性基质的膨胀 度比疏水性的大。 第一节： 柱 层 析 6、外水体积（Vo）：是基质颗粒之间的体积总和。 7、内水体积（Vi）：是基质颗粒内部的体积总和。 8、基质体积（Vg）：是基质自身所具有的体积。 Vo、 Vi、 Vg都是随着床体积和基质性质变化而变化的。 9、床体积（Vt）：通常床体积是指膨胀后的基质在层析柱中所占有的体积（Vt）。 Vt是基质的外水体积Vo和内水体积Vi以及自身体积Vg的总合。 Vt= Vo + Vi + Vg 10、洗脱体积（Ve） ：是指某一组分从柱顶部到底部的洗脱液中出现浓度达到最大值时的流动相体积。 11、分配系数和迁移率：分配系