鸭疫里默氏杆菌PCR快速检测方法的建立.pdfVIP

弘笛 科 字 UU ．1l 鸭 疫 里 默 氏 杆 菌 PCR，I央速 检 测 方 法 的 建 立 郭远奎(荣成市崖头畜牧兽医站，山东 264300) 摘 要：在鸭疫里默 氏杆菌外膜蛋 白保守区设计 了一对特异性引物，建立 PCR方法，对 5株 已知血清型的鸭疫里默氏杆菌纯培养菌和6株，临床分离未定型的里默氏杆菌菌株以及病死鸭病 料组织进行检测，结果表明不同样品都可扩增出592bp的特异 目的条带，而对鸭源大肠杆菌、鸭源 多杀性巴氏杆菌、鸭源沙门氏菌的扩增结果均为阴性，说明该PCR法具有较好的特异性，可用于 快速鉴定鸭疫里默 氏杆菌，也适用于病料的直接检测 。 关键词：鸭疫里氏杆菌；聚合酶链式反应 ；检测 中图分类号：S858．32 文献标识码 ：B 文章编号：l673—1085(2O09)ll一00O6—03 鸭疫里默氏杆菌病即鸭浆膜炎．是由鸭疫里默 1．1 材料 氏杆菌 (Riemerellaanatipestifer，RA)引起鸭的一种 1．1．1 供试菌株 已知血清型鸭疫里默氏杆菌 5 急性或慢性传染病，发病率为 10％～90％，病死率高 株和鸭源大肠杆菌 、沙门氏菌、巴氏杆菌各两株 由 达80％[1l。给养鸭业造成了巨大的经济损失。目前 山东省农业科学院家禽研究所提供，其他 6株未定 RA已成为危害我国养鸭业的主要细菌性传染病之 型鸭疫里默氏杆菌菌株从发病鸭场分离并鉴定。 一 吲。 临床上鸭疫里默氏杆菌常与大肠杆菌、巴氏杆 1．1．2 主要试剂和培养基 细菌基因组 DNA提取 菌及沙 门氏菌混合感染．由于其临床症状和病理变 试剂盒为百泰克公司产 品，Taq酶及其缓冲液 、 化与上述细菌病很相似，难以鉴别进而不能有效防 dNTP、DNAMarkerDl200O购 自宝生物工程 (大连) 治。需建立快速诊断方法来区分 。现在的鸭场在发 有限公司，TSA(Tryptics0yAgar)为青岛海博公司 现鸭群有病时，立即用药，这样的鸭场送检的病料常 产品。 分离不到细菌，为了进行RA的流行病学研究必须 1．2 PCR扩增 建立鉴定RA的分子方法 本研究为解决以上问题 ll2．1 PcR引物 根据已发表 RA的外膜蛋 白A 建立了鸭疫里默氏杆菌的PcR检测方法 (0mpA)基因序列，在其高度保守区设计了一对特异 1 材料与方法 性弓I物 ：P1：5 一GGAGCCAACTATICAGAC一3 ． 收稿 日期：2009一l0一l6 P2：5 一GACCTGGAACATrAGGACACT一3 ，扩增 现阶段所分离鉴定出的H、H]、H、H、H 及 H 等 流感具有重要的公共卫生意义。AIV的生物学和遗 多种亚型的禽流感病毒株也提示，谁也无法预料我 传学特性决定了研究要不断面临新的挑战，使得对 们将面对何种生物学特点和致病力的禽流感病毒， 禽流感的研究和控制己刻不容缓。必须用科学的方 我们注定要不断面临新的挑战 法来控制禽流感的流行 。因此 ．新的更有效的疫苗 由于禽流感是一种全球性的烈性传染病，可在 研究势在必行。 “高科技”的禽流感疫苗必须集防 宿主中 断发乍变异和基因重组 ，因此将是 2l世 病 、防病毒隐藏、防病毒扩散于一身。理想的禽流感 纪我 养 ll，I… 最大的瘟疫性威胁 禽流感可在 疫苗必须同时具备诱导产生 中和抗体和 CTL反 禽、猪和人r{，进f传播 AIV不仅作为人流感的 应。随着科技的进步和人们对生命的认识不断加 最大琏 4 …J接域 人类健康，而且可作为人类