HOLC法测定排石合剂中芍药苷的含量.docVIP

HOLC法测定排石合剂中芍药苷的含量 叶文慧1 陈露雨1 范丽梅2 陈思3 胡春玲4 通讯作者:李晖△ （广东省妇幼保健院 511400） 摘要：目的 建立用高效液相色谱法测定排石合剂中芍药苷的方法。方法 以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（30:70)为流动相；检测波长为230nm。结果 芍药苷浓度在5.94μg/ml～594μg/ml之间线性关系良好（r=1.0000）,平均回收率为99.12%。结论 该方法简便，准确，重现性好。 关键词：高效液相色谱；排石合剂；芍药苷；含量测定 排石合剂由金钱草 鸡内金 地龙 白芍 川牛膝 元胡 泽泻 茯苓 滑石 小蓟 桃仁 红花 甘草 车前子等13味药材组成，为我院自制制剂，有清热利湿，理气活血，通淋排石之功效；主治各种泌尿系结石。包括肾盏、肾盂、输尿管、膀胱结石。参考相关文献参[ 1-12 ]，本实验选择芍药苷作为指标成分，采用高效液相色谱法对该制剂中主要药物白芍的含量进行研究，其结果可为该制剂建立完善的质量标准提供一定的参考依据。 1仪器与试药 1.1仪器：Agilent 1200 高效液相色谱仪（紫外检测器）；岛津LC-20A高效液相色谱仪（PDA检测器）；Sartorius BT125D电子天平 对照品及来源：（中国食品药品检定研究院，批号：11）试剂：甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂均为分析纯色谱条件与系统适用性试验样品制备 2.1供试品溶液的制备：即得。 2.2对照品溶液的制备：取对照品适量，精密称定，加制成每1ml含0μg的溶液，即得。 3方法学考察 3.1最大吸收波长的确定 取对照品，进行波长扫描，在nm和276nm处有最大吸收，参考相关资料确定检测波长为nm。 图1 芍药苷紫外吸收光谱 2.3.2精密度试验 3.2.1重复性 同一均匀供试品，连续取样6，照设定的方法分别测定含量。试验结果表明，该方法重复性良好。结果见表1。 表1 重复性试验结果 1 2 3 4 5 6 RSD% 取样量 含量% 2.3.2.2中间精密度 结果见表2 表2 中间精密度试验结果 1 2 3 4 5 6 RSD% 取样量 含量% 2.3.3准确度试验 取已知含量的供试品适量，加入适量对照品，制成低、中、高三个不同浓度的供试品溶液各3分，分别测定其含量，计算回收率。试验结果表明，该方法准确度符合规定。结果见表3。 表3 回收率试验结果 取样量加入量测得量回收率 低 98.9% 1 0.0594 0.2035 99.2% 中 0.2355 99.3% 1 0.0891 0.2367 98.7% 高 99.1% 1 0.1188 0.2652 99.5% 2.3.4线性和范围 取对照品，加制成标准系列，分别测定峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。试验结果表明，浓度在μg/ml～μg/ml之间线性关系良好。测定结果见表4。 表4 线性关系考察结果 1 2 3 4 5 6 响应因子RSD% 浓度（μg/ml） 峰面积 响应因子f % 标准曲线方程 A= C-0.6019 r =1.0000 2.3.5耐用性试验 分别考察流动相比例变化5％、流动相pH变化0.2、柱温变化5、流速相对值变化20％等影响因素，按上述色谱条件进行测试；结果表明，样品中含量几乎不受影响，试验条件适用范围广。结果见表5。 表5 各影响因素对试验结果的影响 1 2 3 4 5 6 RSD% 不同比例含量54 0.2827 0.2865 0.2853 0.2846 0.9% 不同pH 含量0.2863 0.2855 0.2837 0.2862 0.2841 0.2838 1.2% 不同流速含量0.2852 0.2849 0.2853 0.2874 0.2838 0.2864 0.7% 不同柱温含量0.2864 0.2829 0.2837 0.2851 0.2832 0.2858 1.1% 2.3.6专属性试验 取不含的阴性样品，依法测定，实验结果表明，阴性样品无干扰；PDA检测器记录的色谱峰纯度检查，峰纯度匹配度1000，表明峰纯度符合规定，该方法专属性良好。见图-4。 图对照品HPLC色谱图 图 阴性样品HPLC色谱图 图HPLC色谱图 3.7样品稳定性试验 取本品6份，样品制备项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。分别于0h、6h、12h、24h各进样一次，测定供试品中的含量，以观察供试品溶液在检测过程中待测成分的稳定性。试验结果表明供试品溶液在24小时内稳定性