17种真菌凝集素的凝血活性的研究.pdfVIP

2009正 辽 宁 林 业 科 技 2009 第 1期 JournalofLiaoningForestry Science Technology № l 17种真菌凝集素的凝血活性研究 刘鹏举，苏 瑛，唐 咏 ，孙 东 (沈阳农业大学，辽宁沈阳 110161) 摘 要：通过Tris—HC1、Na：HPO一NaliPO两种缓冲液，从 17种供试大型真菌中粗提凝集素，以3％ 兔红细胞对所得34种提取物进行凝血检测，结果表明，绝大多数真菌提取液具有凝血活性，其凝血 效价最高的为经Tris—HCI缓冲液提取的斑褐孔菌及经Na2HP0一Nali：PO提取的蛹虫草、灰平菇。 关键词：真菌；凝集素；凝血活性 中图分类号：$759．81 文献标识码：A 文章编号：1001—1714{2009)01—0037—02 凝集素 (1ectin)是一类能够凝集细胞或沉降复 3％兔红细胞生理盐水悬液：新西兰大白兔耳缘 合糖质 ，非免疫源性的蛋 白质或糖蛋 白，很少具有 静脉取血，2％EDTA抗凝 ，2500ffmin离心3min，沉 酶活性n。目前，真菌凝集素研究的较少，全世界已 淀血细胞生理盐水洗涤5次，弃上清，根据沉淀红细 经纯化的凝集素约有 100多种 ，只有Sigma公司的 胞的体积，用生理盐水配制成3％的红细胞生理盐 产品——双胞蘑菇凝集素(ABL)是具有商业价值 水悬液，冰箱保存备用。 的。真菌凝集素广泛存在于真菌的多个部位，在其 l-3 大型真菌凝集素粗提液凝血活性检测 休眠、生长、形态发生以及寄生感染后的形态改变 取各种供试真菌子实体或菌核干粉5g分别加 和菌根化早期阶段分子识别过程中行驶特殊功能； 人以上两种缓冲液 100ml，磁力搅拌器搅拌 1h，浸 同时，真菌凝集素已经在分类学、胚胎学、癌症形成 提8h，8000r／min离心15min，上清液作为样品粗提 机制、膜复合糖脂的修饰、细胞分化等方面有广泛 液放人冰箱保存备用。取一张96孔v型血凝板，每 的应用 ，因此从我国广阔的真菌资源中筛选出凝 列各孔加人对应提取粗样的缓冲液25~tl，第 l行奇 集素含量高且凝集效价高的真菌，进一步明确其性 数孔分别加入样品粗提液251xl，偶数孔加入对应的 质及功能，尤其是在抗肿瘤、抗病毒和农作物及森 经 100℃lh煮沸过的样品粗提液25~tl，每列依次倍 林树木病虫害方面的功能，研发具有 自主知识产权 比稀释，对照为不加样品的生理盐水 ，最后分别加 的凝集素产品将具有广阔的前景。 入3％兔血细胞悬液25~tl(每张96孔血凝板做一个 1 材料与方法 重复)静置1～2h，观察结果 。 1．1 供试菌种 2 结果与分析 真菌子实体 17种 ，购 自沈阳中街同仁堂药店 从表 1可以看出，供试 l7种大型真菌分别属于 及黑龙江圣普土特产公司，粉碎过40目筛备用。 l0个科，且绝大多数具有凝血活性，只有经Tris—HC1 1．2 溶液配制 缓冲液提取的桦褶孔菌及经Na2HPO-NaliPO提 pH7．8，0．025mol／LTris—HC1缓冲液：25mllmol／L 取的云芝、无柄赤芝不具有凝血活性，经Tris—HCI Tris溶液，l7．25mllmol／LHCI，蒸馏水定容至1000ml， 缓冲液提取的凝血活性达到32以上的有 5种 ；经 调pH至7．8备用 】。