pGCy-mIL-12p40载体的构建%2c包装及其免疫生物学意义的探讨.pdfVIP

48小时后收集上清，0．45肚m的滤膜过滤，保存于一80℃。 6．流式细胞术测定滴度：预先将NIH3T3细胞接种(2×10 5／35mm培养皿)，24小时后加入终浓度 可直接用流式细胞仪分析。估算病毒滴度的公式为：病毒滴度(感染性颗粒／m1)一NIH3T3细胞数×阳 性率／上清量(m1)。滴度4×106的可基本满足实验研究和临床应用要求。 结 果 一、pGCy—mlI。一12p40逆转录病毒载体的建立及鉴定 性关节炎的一种拮抗剂。该载体的建立对RA免疫机理和免疫应用方面的研究有重要意义。 二、逆转录病毒的获得及其滴度分析 小时用流式细胞仪分析YFP阳性细胞比例。每个阳性细胞代表1个具有感染能力的病毒颗粒，可推算出 上清中病毒的滴度。选择滴度4×106克用于进一步实验研究和临床应用。 讨 论 类风湿关节炎(RA)是一种以累及周围关节为主的多系统炎症性自身免疫病，是老年人骨关节病的重 要相关因素之一。该病以慢性滑膜炎和骨软骨结构损伤为特征，进而发展造成关节破坏和功能受损，其病 机不清。 目前在RA的治疗上尚无满意的方法。传统的非甾体类抗炎药和激素不能有效的控制病情进展；抗 风湿药物起效慢，长期副作用大；新型的生物制剂如IL一1受体拮抗剂(IL～1Ra)、可溶性肿瘤坏死因子 (sTNFR)等疗效突出，但需多次给药，费用昂贵，并且靶向作用较差，可能会导致全身免疫抑制状态。利 用载体导入治疗基因的方法，从理论上可以达到目的基因在体内长期，有效的表达，并且它也可以通过对 病变部位的局部治疗来避免发生全身免疫抑制，从而克服生物制剂的上述缺点。其中小鼠白血病病毒 (MMI。V)来源的逆转录病毒载体在该研究中的应用最广泛，该载体可将目的基因稳定整合入染色体 DNA，而且具有无病毒蛋白产生，无抗原性的优点。 目的基因的选择是研究RA病机及其治疗的重要环节之一。较多资料显示CD4+T细胞介导的自身 免疫反应在RA致病中起重要作用，无论在人还是在动物模型中都显示干扰素诱发的Thl细胞在发生自 在RA治疗中的探索应用引起研究者的兴趣。其中细胞因子IL一12是诱导IFN～-／产生的强诱导剂并 分子，它是Thl介导的自身免疫性关节炎发生的一种拮抗剂，可以作为一个治疗的靶点。由于t述原因， 体，并包装成具有较强感染能力的完整的病毒颗粒。实验中我们采用单酶切平末端连接，技术要求较高， 成功获得含有目的基因的克隆，为进～步用免疫生物学手段治疗胶原诱导的关节炎提供了十分关键的技 术条件。 在此实验的基础上，我们将进行更深入的研究，用这种逆转录病毒去感染cⅡ胶原活化的CD4+T细 胞，因为cⅡ胶原活化的CD4+T细胞具有自身抗原特异性，淋巴细胞的归巢作用使其能针对关节局部， 靶向性很好。这种局部递呈免疫调节修饰蛋白，可以直接调节自身免疫反应，一方面能有效调节淋巴因子 治疗功能，同时又可避免全身自身免疫抑制(这是RA基因治疗一直需要克服的问题)，将为治疗RA开辟 又一个新途径。此实验中我们进一步探讨了较为理想的治疗RA的生物工程疗法，无论是在RA的免疫 机理研究还是在免疫应用研究方面都具有十分重要的价值。 老年脑血管病致脑心综合征的临床特征 李殿舍赵蕾唐伟雄 181医院老年病科，96301部队干休所，广西桂林541002李贤卓 自从1947年Byer首先报告了脑心综合征(Brain--heart 渐深化。虽然，广义的BHS的概念包括各种颅内疾患引起的继发性心脏损伤，但其中最多见的是急性脑 析报告如下。 资料与方法 一、诊断标准 参照1995年中华医学会第4次全国脑血管病学术会议修订标准，所有患者具备相应临床症状，经 证据者；②发病前有基础冠心病，ACVD发生后，其基础冠心病症状加重或出现新的改变者¨3。 二、一般资料 例(占75．65％)，存在意识障碍者84例(占24．35％)。 三、方法 回顾性研究分析。 结 果 一、脑心综合征发生率 345例老年ACVD患者表现有心脏损害者共计253例，